Dans ce protocole, w e identifié une nouvelle population de cellules mélanocytes comme (également connu sous le nom mélanocytes cardiaques) dans le cœur des souris et des humains qui contribuent à une arythmie auriculaire déclenche chez la souris.
Nous avons identifié une nouvelle population de cellules mélanocytes comme (également connu sous le nom mélanocytes cardiaques) dans le cœur des souris et des humains qui contribuent aux déclencheurs de l'arythmie auriculaire chez la souris. Pour étudier les propriétés électriques et biologiques des mélanocytes cardiaques, nous avons développé une procédure pour les isoler de coeurs de souris que nous avons tirés de celles qui visent à isoler les cardiomyocytes murins néonataux. Afin d'obtenir des mélanocytes cardiaques saines appropriés pour plus vaste patch clamp ou des études biochimiques, nous avons développé une procédure raffinée pour isoler et placage mélanocytes cardiaques basés sur ceux à l'origine conçu pour isoler les mélanocytes cutanés. La procédure est mise en évidence raffiné dans cette revue et produit un plus grand nombre de cellules saines comme des mélanocytes, qui peuvent être étalées en une population pure ou avec des cardiomyocytes.
Nous avons récemment identifié une nouvelle population de cellules dans le cœur de souris et les humains qui expriment des enzymes mélanine synthèse et ressemblent morphologiquement mélanocytes cutanés. Nous avons appelé de mélanocytes cardiaques »ces cellules et avons découvert qu'ils sont présents dans des endroits anatomiques dont arythmie auriculaire déclenche proviennent souvent chez l'homme. Nous avons également constaté mélanocytes cardiaques contribuent à des arythmies auriculaires chez la souris avec la suppression de la lignée germinale DCT. Mélanocytes cardiaques sont peu distribués dans l'atrium de la souris où elles contiennent moins de 0,1% de toutes les cellules auriculaires. Pour étudier les propriétés électriques et biologiques des mélanocytes cardiaques, nous avons développé une procédure pour les isoler du cœur de la souris en utilisant des marqueurs spécifiques mélanocytes Cre inductible. Notre procédure initiale a été développé à partir de ceux utilisés pour isoler les cardiomyocytes murins néonataux et donné de très petits nombres de cellules appropriées pour les enregistrements de patch-clamp ou analyse par PCR. Cependant, pour améliorer la guérisone et la viabilité des mélanocytes cardiaques, pour plus d'une analyse en profondeur électrophysiologique ou des études biochimiques, nous avons développé une procédure raffinée de celles qui visent à isoler les mélanocytes cutanés. Le procédé décrit et démontré dans la présente étude a pour avantage de produire des mélanocytes sains cardiaques qui peuvent être étalées en une population pure ou avec des cardiomyocytes.
Mélanocytes cardiaques sont présents dans des endroits anatomiques dans le cœur qui donnent souvent lieu à des déclencheurs d'arythmie auriculaire. Ces régions comprennent les veines pulmonaires, l'anneau auriculo-ventriculaire, l'oreillette gauche postérieure et le foramen ovale (figure 4). Pour comprendre le rôle de ces cellules jouent dans arythmogénèse, nous développons des techniques de les isoler et d'étudier leur physiologie. Cependant, nous avons constaté que l'a…
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été financé par les Instituts nationaux de la Santé récompense R01 HL105734 à VVPMDL est pris en charge, en partie, par les instituts nationaux de recherche en santé Career Award K08 HL094748. VVP est une chercheuse novatrice de l'American Heart Association soutien d'une subvention 11IRG900384.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |