माउस दिल से प्राथमिक Melanocyte कोशिकाओं की तरह अलग
Summary
इस प्रोटोकॉल में, ई डब्ल्यू आलिंद अतालता चूहों में चलाता है के लिए योगदान है कि चूहों और इंसानों के दिलों में (भी हृदय melanocytes के रूप में जाना जाता है) मेलानोसाईट कोशिकाओं की तरह का एक उपन्यास आबादी की पहचान की.
Abstract
हम चूहों में आलिंद अतालता चलाता है कि योगदान करने के चूहों और इंसानों के दिलों में (भी हृदय melanocytes के रूप में जाना जाता है) मेलानोसाईट कोशिकाओं की तरह का एक उपन्यास आबादी की पहचान की. हृदय melanocytes की बिजली और जैविक गुणों की जांच करने के लिए हम हम नवजात murine cardiomyocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन से व्युत्पन्न है कि माउस दिल से उन्हें अलग करने के लिए एक प्रक्रिया विकसित की है. अधिक व्यापक पैच दबाना या जैव रासायनिक अध्ययन के लिए उपयुक्त स्वस्थ हृदय melanocytes प्राप्त करने के लिए, हम अलग और मूल त्वचीय melanocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन पर आधारित हृदय melanocytes चढ़ाना के लिए एक परिष्कृत प्रक्रिया विकसित की है. परिष्कृत प्रक्रिया इस समीक्षा में प्रदर्शन किया और एक शुद्ध आबादी के रूप में या cardiomyocytes साथ चढ़ाया जा सकता है कि स्वस्थ मेलानोसाईट की तरह कोशिकाओं की बड़ी संख्या का उत्पादन किया जाता है.
Introduction
हमने हाल ही में मेलेनिन संश्लेषण एंजाइम व्यक्त और आकृति विज्ञान त्वचीय melanocytes सदृश कि चूहों और इंसानों के दिल में एक उपन्यास सेल आबादी की पहचान की. हम इन कोशिकाओं 'हृदय melanocytes' कहा जाता है और वे आलिंद अतालता अक्सर मनुष्यों में आरंभ चलाता है जहाँ से शारीरिक स्थानों में मौजूद हैं. हम भी हृदय melanocytes डीसीटी के germline विलोपन के साथ चूहों में आलिंद arrhythmias में योगदान मिला. कार्डिएक melanocytes कम वे सभी आलिंद कोशिकाओं के कम से कम 0.1% शामिल है, जहां माउस प्रांगण भर में वितरित कर रहे हैं. हृदय melanocytes की बिजली और जैविक गुणों की जांच करने के लिए हम Cre-inducible मेलानोसाईट विशिष्ट मार्कर का उपयोग माउस दिल से उन्हें अलग करने के लिए एक प्रक्रिया विकसित की है. हमारे प्रारंभिक प्रक्रिया नवजात murine cardiomyocytes और पैच दबाना रिकॉर्डिंग या पीसीआर विश्लेषण के लिए उपयुक्त कोशिकाओं के झुकेंगे बहुत छोटी संख्या को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया उन लोगों से विकसित किया गया था. हालांकि, चंगा में सुधार करने के लिएवें और electrophysiological विश्लेषण या जैव रासायनिक अध्ययन में गहराई से अधिक के लिए हृदय melanocytes, की व्यवहार्यता, हम त्वचीय melanocytes अलग करने के लिए डिज़ाइन किया गया है उन से एक परिष्कृत प्रक्रिया विकसित की है. इस समीक्षा में वर्णित और प्रदर्शन की प्रक्रिया एक शुद्ध आबादी के रूप में या cardiomyocytes साथ चढ़ाया जा सकता है कि स्वस्थ हृदय melanocytes उत्पादन का लाभ दिया है.
Protocol
Representative Results
Discussion
कार्डिएक melanocytes सामान्यतः आलिंद अतालता चलाता को जन्म दे कि दिल के भीतर शारीरिक स्थानों में मौजूद हैं. इन क्षेत्रों में फेफड़े के नसों, atrioventricular वलय, पीछे बाएं आलिंद और अंडाकार रंध्र (चित्रा 4) शामिल है?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम VVPMDL को स्वास्थ्य पुरस्कार R01 HL105734 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया स्वास्थ्य अनुसंधान कैरियर पुरस्कार K08 HL094748 के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा, भाग में, का समर्थन किया है. VVP अनुदान 11IRG900384 द्वारा समर्थित अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन का एक अभिनव शोधकर्ता है.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |
Riferimenti
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