마우스의 심장에서 차 멜라닌 세포와 같은 세포를 분리
Summary
이 프로토콜에서는 전자 와트 심방 부정맥 쥐에 트리거에 기여 쥐와 인간의 마음에서 (또한 심장 멜라닌 세포라고도 함) 멜라닌 세포와 같은 세포의 새로운 인구를 확인했다.
Abstract
우리는 생쥐에서 심방 부정맥 트리거에 기여 쥐와 인간의 마음에서 (또한 심장 멜라닌 세포라고도 함) 멜라닌 세포와 같은 세포의 새로운 인구를 확인했다. 심장 멜라닌 세포의 전기 화학적 특성과 생물학적 특성을 조사하기 위해 우리는 우리가 신생아 쥐의 심근 세포를 분리하기 위해 설계된로부터 유도 된 마우스의 마음에서 그들을 분리하는 절차를 개발했다. 더 광범위한 패치 클램프 또는 생화학 적 연구에 적합한 건강 심장 멜라노를 얻기 위해, 우리는 단리 및 원래 피부 멜라닌 세포를 분리하기 위해 설계된 이들에 기초하여 심장 멜라노 도금을위한 정제 과정을 개발 하였다. 정제 과정이 리뷰에서 설명하고 순수한 인구 또는 심근으로 도금 할 수있다 건강한 멜라닌 세포와 같은 세포의 큰 숫자를 생산하고있다.
Introduction
우리는 최근 멜라닌 합성 효소를 표현하고 형태 학적으로 피부 멜라닌 세포를 닮은 쥐와 인간의 심장에 새로운 세포 인구를 확인했다. 우리는이 세포의 멜라닌 세포를 심장 '이라고하고 심방 부정맥은 종종 인간에서 발생 트리거되는 해부학 적 위치에 있습니다 발견했다. 우리는 또한 심장 멜라닌 세포는 DCT의 생식 세포 삭제와 생쥐에서 심방 부정맥에 기여했습니다. 심장 멜라노가 띄엄 그들은 모두 심방 세포의 0.1 % 미만을 포함 할 마우스 심방에 걸쳐 분산된다. 심장 멜라닌 세포의 전기 화학적 특성과 생물학적 특성을 조사하기 위해 우리는 Cre 호텔 유도 멜라닌 세포 특정 마커를 사용하여 마우스 마음에서 그들을 분리하는 절차를 개발했다. 당초 절차는 신생아 쥐의 심근 및 패치 클램프 기록 또는 PCR 분석에 적합한 세포의 수득 매우 작은 수를 분리하기 위해 사용되는 것들로부터 개발되었다. 그러나, 치료를 개선하기 위해일 및 전기 생리 분석 또는 생화학 적 연구에 대한 심층적 인 이상 심장 멜라닌 세포의 생존, 우리는 피부 멜라닌 세포를 분리하기 위해 설계된에서 정제 과정을 개발했다. 이 리뷰에서 설명하고 입증 절차는 순수한 인구 또는 심근으로 도금 될 수 건강한 심장 멜라닌을 생산하는 장점이있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
심장 멜라닌 세포는 일반적으로 심방 부정맥 트리거를 야기 심장 내에서 해부학 적 위치에 있습니다. 이 지역은 폐 혈관, 방실 고리, 후방 좌심방과 난원 공 개존증 (그림 4)를 포함한다. 이러한 세포가 arrhythmogenesis에서의 역할을 이해하기 위해, 우리는 그들을 격리하고 그들의 생리학을 연구하는 기술을 개발한다. 그러나, 우리는이 기술을 개선하는 것은 심장 멜라닌 세포의 건강하고…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 VVPMDL에 건강 상 R01 HL105734의 국립 연구소에 의해 지원되었다 건강 연구 경력 상 K08 HL094748의 국립 연구소에 의해 부분적으로 지원됩니다. VVP 교부 11IRG900384 지원하는 미국 심장 협회 (American Heart Association)의 혁신 연구원이다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |
Riferimenti
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