Perfusione intravascolare di inchiostro nero di carbonio permette la visualizzazione affidabile dei vasi cerebrali
Summary
Analisi di anatomia roditore cerebrovascolari svolge un ruolo importante nella ricerca sperimentale ictus. In questo contesto, la perfusione intravascolare con lattice colorato è stato considerato come uno strumento standard per diversi anni. Tuttavia, questa tecnica comporta diverse limitazioni tecniche che mettono a repentaglio la sua riproducibilità. Qui, descriviamo un metodo semplice per visualizzare i vasi cerebrali in modo riproducibile. Iniezione di una miscela di due inchiostri carbon black commercialmente disponibili attraverso i risultati ventricolo sinistro del miocardio nel riempimento adeguato dei vasi cerebrali con visualizzazione ad alto contrasto. Abbiamo applicato con successo questa tecnica per identificare i punti di anastomosi tra territori vascolari cerebrali di topi con diversi background genetici. Abbiamo finalmente le prove che questo nuovo metodo e semplice per la colorazione del serbatoio può essere combinato con cloruro di trifeniltetrazolio (TTC) colorazione – uno strumento ampiamente utilizzato per osservare e analizzare i volumi di infarto nei topi.
Abstract
La struttura anatomica dei vasi cerebrali è un fattore determinante per l'emodinamica del cervello così come la gravità delle lesioni in seguito insulti ischemici. Vascolarizzazione cerebrale risponde dinamicamente ai diversi stati patofisiologici e presenta notevoli differenze tra i ceppi e in condizioni di manipolazioni genetiche. Essenzialmente, una tecnica affidabile per la colorazione di vasi intracranici è essenziale per studiare la patogenesi di ictus ischemico. Fino a poco tempo, un insieme di tecniche diverse è stato impiegato per visualizzare la vascolarizzazione cerebrale compresa l'iniezione di resina a bassa viscosità, Araldite F, gelatina miscelato con coloranti vari 1 (cioè rosso carminio, India inchiostro) o lattice con 2 o 3 senza nerofumo. Perfusione del bianco composizione di lattice attraverso l'aorta ascendente è stata riportata da Coyle e Jokelainen 3. Maeda et al. 2 hanno modificato il protocollo con l'aggiunta di carbon inchiostro nero per la composizione di lattice per la visualizzazione migliore contrasto delle navi dopo perfusione fisiologica del cervello. Tuttavia, perfusione inefficiente e inadeguato riempimento dei vasi sono spesso sperimentata a causa della elevata viscosità del composto lattice 4. Pertanto, abbiamo descritto una tecnica semplice ed efficace utilizzando una miscela di due inchiostri neri di carbonio disponibili in commercio (CB1 e CB2) per visualizzare la vascolarizzazione cerebrale in modo riproducibile 5. Abbiamo dimostrato che la perfusione con CB1 CB2 + in topi risultati in colorazione significativamente più piccoli vasi cerebrali ad una densità maggiore rispetto alla perfusione lattice 5. Qui, descriviamo il nostro protocollo di individuare i punti di anastomosi tra la parte anteriore (ACA) e medio arterie cerebrali (MCA) per studiare le variazioni delle navi nei topi con differenti background genetici. Infine, abbiamo dimostrato la fattibilità della nostra tecnica in un modello transitoria ischemia cerebrale focale in topi combinando CB1 +CB2-mediata colorazione vaso con colorazione TTC in vari gradi di lesioni ischemiche.
Protocol
Representative Results
Discussion
Perfusione di CB1 CB2 + per iniezione manuale può essere effettuata con successo da senza formazione intensiva in quanto non comporta alcun dispositivo specifico per implicare certa pressione 2,3. L'eterogeneità dei risultati di perfusione nel nostro protocollo è anche trascurabile. Solo 1 animale su 16 non ischemiche animali e 3 su 20 animali ischemici hanno mostrato perfusione incompleta. In questi casi, l'incorporazione di bolle durante la perfusione salina conseguente occlusione di vasi stata p…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare Britta Kaltwasser per la sua eccellente assistenza tecnica e Mahesh Kumar Teli a organizzare la preparazione delle riprese video.
Materials
| Name of reagent | Company Name | Catalog No. |
| Scribtol Schwarz (CB2) | Pelican, Germany | 221 135 |
| Stempelfarbe (CB1) | Herlitz PBS AG, Germany | 10417202 |
| Gedeo Latex | Pebeo, France | 13042B |
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