小鼠生殖道黏膜淋巴细胞分离

Summary

淋巴细胞从小鼠生殖道隔离的一种有效的方式来进行说明。此方法利用酶消化和Percoll梯度分离，以允许有效地隔离。此技术是用于在其他物种中也适应

Abstract

粘膜表面，包括胃肠道，泌尿生殖道，呼吸道，进入门户网站的病原体，如病毒和细菌^1。粘膜也电感的网站中的一个主机，以产生对病原体的免疫力，如Peyers在肠道中的补丁和在呼吸道的鼻相关的淋巴网状组织。这种独特的功能使黏膜免疫的宿主防御系统的一个重要参与者。许多研究都集中在胃肠道和呼吸道粘膜部位。然而，生殖黏膜部位出现了小调查。生殖道粘膜是性传播疾病（STD），包括细菌和病毒感染的主要感染部位。性传播疾病是当今世界面临的最严重的健康挑战之一。美国疾病控制和预防中心估计，有19万个新的传染病，每年在美国。 STDS成本，美国的医疗保健系统每年的170亿美元的^2，个人成本更在近期和终身的健康后果。为了应对这一挑战，需要更深入的了解生殖黏膜免疫和分离淋巴细胞，这些研究是一个必不可少的组成部分。在这里，我们提出了一种方法，再现分离淋巴细胞小鼠女性生殖道的免疫学研究，可以修改为其他物种适应。下面描述的方法是基于在一个鼠标。

Protocol

1。去除生殖道安乐死鼠标采用批准的指引。低正中切口，并收回皮肤。 隔离和删除整个生殖道，由输卵管阴道口。 打开整个道纵向剪下来的。 良好的手术剪刀切下生殖道细小的碎片（<1毫米左右），一个培养皿完整的RPMI-10/EDTA（见下面的公式），并于125毫升容量瓶中，在室温下搅拌组织在磁力搅拌器上设置15分钟。此过程重复两次，然后将上清液，其中包含上皮细…

Discussion

在这个协议中，它展示了如何准备淋巴细胞小鼠生殖道，很容易掌握。在此过程中最关键的一点是维持细胞活力的保持将细胞置于冰上。从该方法的细胞产量取决于技术，处理技能，鼠标（幼稚或感染后的天）的感染状态，病原体（细菌，病毒，真菌）和部分的小鼠生殖道年审（输卵管，子宫，阴道内段或整个生殖道）。本集团及其他已出版了各种不同的淋巴细胞群的研究小鼠生殖道^{5-7。</sup…}

Materials

Name	Company	Catalogue number
Collagenase	Sigma Life Sciences	C2139-1G
Percoll	GE Healthcare Bio-Sciences	17-0891-01
RPMI1640	Gibco by Life Technologies	11875