Isolering af lymfocytter fra Mouse Genital Tract mucosa
Summary
En effektiv måde at isolere lymfocytter fra mus genitale er beskrevet. Denne fremgangsmåde drager fordel af enzymspaltning og Percoll gradient separation for at tillade effektiv isolering. Denne teknik kan også tilpasses til at anvendes i andre arter
Abstract
Slimhindeoverflader, herunder i det gastrointestinale, urogenitale, og luftveje, portaler for indrejse for patogener, såsom virus og bakterier 1 giver. Slimhinder er også induktive sites i værten til at generere immunitet mod patogener, såsom Peyers patches i tarmkanalen og nasal-associerede lymforetikulære væv i luftvejene. Denne unikke funktion giver slimhindeimmunitet som en afgørende spiller i værtens forsvarssystem. Mange undersøgelser har været fokuseret på mave og respiratorisk slimhinder. Imidlertid har der været meget undersøgelse af reproduktive slimhinder. Det genitale mucosa er det primære infektionssted for seksuelt overførte sygdomme (STD), herunder bakterie-og virusinfektioner. Kønssygdomme er en af de mest kritiske sundhedsmæssige udfordringer i verden i dag. Centers for Disease Control og Forebyggelse vurderer, at der er 19 millioner nye smitsomme hvert år i USA. STDs koste det amerikanske sundhedssystem 17 milliarder dollar hvert år 2, og omkostningerne individer endnu mere i umiddelbare og livslang sundhedsmæssige konsekvenser. For at imødegå denne udfordring, er en større forståelse for reproduktiv slimhindeimmunitet behov og isolere lymfocytter er en væsentlig del af disse undersøgelser. Her præsenteres en metode til reproducerbar isolere lymfocytter fra murine kvindelige kønsorganer skrifter for immunologiske undersøgelser, der kan modificeres for tilpasning til andre arter. Den nedenfor beskrevne metode er baseret på en mus.
Protocol
Discussion
I denne protokol er det vist, hvordan man forbereder lymfocytter fra mus genitale skrifter og er let mestrer. Det mest kritiske punkt af denne proces er at opretholde cellelevedygtighed ved at holde cellerne på is. Celleindholdet af denne metode afhænger af teknik, håndtering dygtighed, den infektiøse tilstand af musen (naive eller dag efter infektion), patogenet (bakteriel, viral, fungal), og den del af den murine kønsveje undersøgt (æggeleder, uterus, vaginal segment eller hele kønsorganer). Vores gruppe og an…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vi vil gerne takke NIH til finansiering af tilskud R01-AI026328 (KAK) og R01-AI079004 (KAK).
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
Riferimenti
- M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
- Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
- Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
- Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
- Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
- Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
- Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
- Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
- Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
- Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
