En effektiv måde at isolere lymfocytter fra mus genitale er beskrevet. Denne fremgangsmåde drager fordel af enzymspaltning og Percoll gradient separation for at tillade effektiv isolering. Denne teknik kan også tilpasses til at anvendes i andre arter
Slimhindeoverflader, herunder i det gastrointestinale, urogenitale, og luftveje, portaler for indrejse for patogener, såsom virus og bakterier 1 giver. Slimhinder er også induktive sites i værten til at generere immunitet mod patogener, såsom Peyers patches i tarmkanalen og nasal-associerede lymforetikulære væv i luftvejene. Denne unikke funktion giver slimhindeimmunitet som en afgørende spiller i værtens forsvarssystem. Mange undersøgelser har været fokuseret på mave og respiratorisk slimhinder. Imidlertid har der været meget undersøgelse af reproduktive slimhinder. Det genitale mucosa er det primære infektionssted for seksuelt overførte sygdomme (STD), herunder bakterie-og virusinfektioner. Kønssygdomme er en af de mest kritiske sundhedsmæssige udfordringer i verden i dag. Centers for Disease Control og Forebyggelse vurderer, at der er 19 millioner nye smitsomme hvert år i USA. STDs koste det amerikanske sundhedssystem 17 milliarder dollar hvert år 2, og omkostningerne individer endnu mere i umiddelbare og livslang sundhedsmæssige konsekvenser. For at imødegå denne udfordring, er en større forståelse for reproduktiv slimhindeimmunitet behov og isolere lymfocytter er en væsentlig del af disse undersøgelser. Her præsenteres en metode til reproducerbar isolere lymfocytter fra murine kvindelige kønsorganer skrifter for immunologiske undersøgelser, der kan modificeres for tilpasning til andre arter. Den nedenfor beskrevne metode er baseret på en mus.
I denne protokol er det vist, hvordan man forbereder lymfocytter fra mus genitale skrifter og er let mestrer. Det mest kritiske punkt af denne proces er at opretholde cellelevedygtighed ved at holde cellerne på is. Celleindholdet af denne metode afhænger af teknik, håndtering dygtighed, den infektiøse tilstand af musen (naive eller dag efter infektion), patogenet (bakteriel, viral, fungal), og den del af den murine kønsveje undersøgt (æggeleder, uterus, vaginal segment eller hele kønsorganer). Vores gruppe og an…
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gerne takke NIH til finansiering af tilskud R01-AI026328 (KAK) og R01-AI079004 (KAK).
Name | Company | Catalogue number | |
Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |