海馬のインスリンおよびマイクロインジェクション<emインビボ></em空間記憶テスト中>マイクロダイアリシス
Summary
直接海馬内マイクロインジェクションによってhippocampally依存空間ワーキングメモリの変調は、同行と続く<em生体内で></em意識、行動、動物における代謝産物の>マイクロダイアリ。
Abstract
グルコース代謝には、2 – デオキシグルコースと機能的磁気共鳴画像法などの方法の基礎を形成し、局所神経活動のための有用なマーカーである。しかし、動物モデルでのそのような方法を使用します。麻酔を必要とし、それ故に両方が脳の状態を変化させ、行動措置を防ぎます。代替の方法は目を覚まし、気ままな動物におけるグルコース、乳酸、及び関連代謝産物の脳細胞外液濃度の連続測定を取るために生体内微小透析での使用です。特定の脳領域および/または急性薬理操作に依存するように設計タスクと組み合わせる場合は、この方法は特に有用であり、例えば、空間的ワーキングメモリタスク（自発的交替）時の海馬の測定値である乳酸の細胞外グルコースと立ち上がりで泳ぎを見せる強化された糖の1,2の挑発、そして海馬内インスリン投与は、メモリを向上させ、海馬グリコールを増加させ、両方のysis 3。インスリンなどの物質は、代謝物を測定するために使用されるのと同じマイクロダイアリシスプローブを介して海馬に送達することができる。海馬機能の尺度としての自発的交替の使用は、ストレスの多い動機（ 例えばフットショック）、拘束、またはタスクのパフォーマンスと代謝の両方を変更することができるすべては報酬（ 例えば食品）から任意の混同を避けるために設計されており、この作業も提供しています治療の非特異的な影響のための制御を可能にする運動活性の尺度。組み合わせることで、これらの方法は、行動を規制する神経化学的および代謝の変数の直接測定を可能にします。
Protocol
1。手術の準備取り扱い。動物（最も一般的には、ラットやマウス、行動試験とマイクロダイアリシスとの組み合わせのための方法は、主に麻酔用など必要に応じて、必要な種特異的な適応、との一般的なものがあるが）少なくとも次の10分/日の最小値に対して処理されます手術の2日前まで。豊富な取り扱いが可能混同2,4,5を避けて 、テスト時にストレスのな?…
Representative Results
ラットは手術から急速に回復し、麻酔の中止後30分以内に、アラート運動性とアクティブになっているはずです。手術がきれいに行われ、最小限の歯科用セメントが使用されている場合はカニューレのキャップの影響は最小限であるべきです。感染の兆候は、手術後の監視中に気づいた、またはラットは苦痛や不快感の兆候を示してどのような方法でもあり、すぐに実験を終了している場合?…
Discussion
微小透析で使用されるすべてのソリューションは、0.2μmのフィルターを用いて、直ちに使用前にフィルタリングする必要があります。ガイドカニューレにプローブを挿入した後、その流れが妨げられており、サンプル採取が行われていることを確認するために守ってください。流れが挿入後に停止した場合、最も可能性の高い原因は、挿入時に不十分なケアによって生じるプローブ膜への損?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIH / NIDDK（ECMへDK077106）によってサポートされていました。
Materials
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
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| CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
| Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
| Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |
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Citazione di questo articolo
McNay, E. C., Sandusky, L. A., Pearson-Leary, J. Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing. J. Vis. Exp. (71), e4451, doi:10.3791/4451 (2013).