Hippocampus Insulin mikroinjeksjon og<em> In vivo</em> Mikrodialyse Under Spatial Memory Testing

Summary

Modulering av hippocampally-avhengige romlig arbeidshukommelse ved direkte intrahippocampal mikroinjeksjon, ledsaget og fulgt av<em> In vivo</em> Mikrodialyse for metabolitter i bevisste, oppfører dyr.

Abstract

Glukose metabolisme er en nyttig markør for lokal nerveaktivitet, danner grunnlaget for metoder for eksempel 2-deoxyglucose og funksjonell magnetisk resonans imaging. Imidlertid kan bruk av slike metoder i dyremodeller krever anestesi og dermed begge endrer hjernen staten og forhindrer atferdstiltak. En alternativ metode er bruk av di vivo mikrodialyse å ta kontinuerlig måling av hjernen ekstracellulær væske konsentrasjoner av glukose, laktat, og relaterte metabolitter i våken, uhemmet dyr. Denne teknikken er spesielt nyttig når den kombineres med oppgaver for å stole på bestemte områder av hjernen og / eller akutt farmakologisk manipulasjon, for eksempel hippocampus målinger i løpet av en romlig hukommelsen oppgave (spontan veksling) viser en dukkert i ekstracellulær glukose og økning i laktat som er kan tyde på økt glykolyse ^1,2, og intrahippocampal insulin administrasjon både forbedrer hukommelsen og øker hippocampus glykolYsis ^3. Stoffer som insulin kan leveres til hippocampus via samme mikrodialyse sonden som brukes for å måle metabolitter. Bruken av spontan alternering som mål på hippocampus funksjon er utformet for å unngå forvirre fra stressende Motivatorer (f.eks footshock), beherskelse, eller belønninger (f.eks mat), som alle kan endre både utførelsen av oppgaver og metabolisme; denne oppgaven gir også en måle av motorisk aktivitet som tillater kontroll for uspesifikke effekter av behandlingen. Sammen gir disse metodene tillater direkte måling av nevrokjemiske og metabolske variabler som regulerer atferd.

Protocol

1. Kirurgi Forberedelse Håndtering. Dyr (som oftest rotter eller mus, selv om metoden for mikrodialyse og kombinasjon med atferdsmessige testing er i stor grad en generell ett med noen nødvendige artsspesifikke tilpasninger som trengs, for eksempel for anestesi) håndteres i minst 10 min / dag i minst to dager før operasjonen. Omfattende håndtering har vist seg å la dyrene i en trykklett tilstand på tidspunktet for testing, unngå mulig forvirre 2,4,5. Vi vil bruke rotter gjennom den…

Representative Results

Rotter bør komme seg raskt fra kirurgi og være på vakt, bevegelige og aktiv innen 30 min etter seponering av anestesi. Virkningen av kanylen hetten skal være minimal dersom operasjonen er utført rent og minimal tannsement brukes. Hvis noen tegn på infeksjon er lagt merke til i løpet av postoperativ overvåking, eller rotte er på noen måte viser tegn på stress eller ubehag, umiddelbart avslutte forsøket, og dette bør være svært sjeldne. Under håndtering før testing, bør dyrene være på vakt, fritt beveg…

Discussion

Alle løsninger som brukes i mikrodialyse bør filtreres umiddelbart før bruk ved hjelp av en 0,2 mikrometer filter. Etter innsetting av sonden inn i føringen kanylen, observere for å bekrefte at strømmen er uhindret og prøvetaking skjer. Dersom vannstrømmen stopper etter innsetting, er den mest sannsynlige årsaken til skade på sonden membranen forårsaket av utilstrekkelig omsorg på innsetting, og en fersk sonde må erstattes.

Som nevnt ovenfor, er en viktig fordel med disse metode…

Materials

			The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include:
CMA 12 microdialysis probes	CMA/ Microdialysis	CMA-12-XXX	These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’
Human insulin (Humulin)	Eli Lilly	N/a
Liquid swivel	Instech	375/D/22QM	This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining.