Passaging hues मानव भ्रूणीय स्टेम trypsin के साथ सेल लाइनों
Summary
हम इस वीडियो में प्रदर्शित कैसे हमारी प्रयोगशाला नियमित trypsin के साथ रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइनों अंश.
Abstract
हम इस वीडियो में प्रदर्शित कैसे हमारी प्रयोगशाला नियमित trypsin के साथ रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइनों अंश. मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं सेल संस्कृति की कलाकृतियों हैं, और उच्च जनसंख्या दोहरीकरण के साथ karyotypic असामान्यताएं प्राप्त करते हैं. उचित passaging एक स्वस्थ, undifferentiated, karyotypically सामान्य रंग मानव भ्रूण स्टेम सेल संस्कृति को बनाए रखने के लिए आवश्यक है. सबसे पहले, एक विस्तार संस्कृति पीबीएस में धोया जाता है अवशिष्ट मीडिया और सेल मलबे को हटाने के है, तो कोशिकाओं को गर्म 0.05% trypsin – EDTA की एक न्यूनतम मात्रा के साथ मढ़ा हैं. Trypsin पांच मिनट के लिए कोशिकाओं पर छोड़ दिया है, तो कोशिकाओं धीरे एक 2ml सीरम वैज्ञानिक विंदुक के साथ उखाड़ फेंकना हैं. सेल निलंबन एकत्र की है और hues मीडिया की एक बड़ी मात्रा के साथ मिश्रित है, तो कोशिकाओं कोमल centrifugation द्वारा एकत्रित कर रहे हैं. निष्क्रिय trypsin मीडिया मिश्रण निकाल दिया है, और कोशिकाओं पूर्व गर्म hues मीडिया में resuspended. एक उचित विभाजन अनुपात (आम तौर पर 1:10 1:20) की गणना की जाती है, और कोशिकाओं को फिर से 1-2 दिन पुरानी विकिरणित माउस भ्रूण fibroblast फीडर कोशिकाओं की एक monolayer युक्त थाली पर चढ़ाया. नव वरीयता प्राप्त hues संस्कृति की थाली 48 घंटे के लिए undisturbed छोड़ दिया है, हर दिन तो मीडिया उसके बाद बदल गया है. यह महत्वपूर्ण है एक एकल कक्ष निलंबन नहीं trpsinize नीचे, के रूप में इस karyotypic असामान्यताएं शुरू करने का जोखिम बढ़ जाती है.
Protocol
Discussion
इस वीडियो में हम कैसे हम नियमित बीतने hues हमारी प्रयोगशाला में मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइनों का प्रदर्शन किया. कुशल और नियमित बंटवारे और passaging एक स्वस्थ मानव भ्रूण स्टेम सेल लाइन को बनाए रखने के लिए आवश्यक है. Trypsin मध्…
Materials
Riferimenti
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