Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

Summary

Este artigo descreve um método para a visualização de artérias cerebrais de rato através de uma janela craniana via craniectomia temporal, a fim de visualizar partes proximais da artéria cerebral média (<strong> Figura 1</strong>). Este método versátil, pode ser combinada com várias técnicas de administração de fármacos para medir a reactividade da artéria cerebral<em> In vivo</em>.

Abstract

Criação de uma janela craniana é um método que permite a visualização directa das estruturas sobre a superfície cortical do cérebro ^1-3. Esta técnica pode ser realizada em diversos locais do cérebro de rato que se sobrepõem, mas é mais facilmente realizado através da criação de uma craniectomia sobre os ossos de fácil acesso frontal ou parietal. Mais frequentemente, temos usado esta técnica, em combinação com o modelo de oclusão endotelina-1 na artéria cerebral média de AVC isquémico para quantificar as alterações no diâmetro dos vasos da artéria cerebral média, que ocorrem com a injecção de endotelina-1 para o parênquima cerebral adjacente ao MCA proximal ^{4, 5.} A fim de visualizar a porção proximal da MCA, durante endotelina -1 induzida MCAO, usamos uma técnica para criar uma janela craniana no osso temporal na face lateral do crânio de rato (Figura 1). Artérias cerebrais pode ser visualizada quer com a dura intacta ou com a dura-máter e incisa RetraCTED. Mais comumente, deixamos a dura intacta durante a visualização desde a endotelina-1 induzida por MCAO envolve a entrega do péptido vasoconstritor para o parênquima cerebral. Isto evita a necessidade de incisão na dura directamente sobre os vasos visualizado para a entrega da droga. Este protocolo irá descrever como criar uma janela craniana para visualizar artérias cerebrais de uma forma faseada, bem como a forma de evitar muitas das armadilhas potenciais referentes a este método.

Protocol

Este protocolo foi aprovado pelo Animal Care Institucional e Comitê de Uso (IACUC) da Universidade da Flórida e está em conformidade com o "Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório" (oitava edição, a National Academy of Sciences, 2011). Materiais Animais: Oito semanas de idade, macho, Sprague Dawley (Farms Charles River, Wilmington, MA, EUA) pesando 250-300 g no momento da cirurgia. Anestesia Sistema de anestesia por inal…

Representative Results

As imagens fixas tiradas do programa de vídeo captada que a mudança de diâmetro da artéria cerebral após a injecção de ET-1 pode ser facilmente observado utilizando esta técnica janela craniana (Figura 2). Poucos minutos após a injeção de ET-1, o navio começará a se contrair. Eventualmente, os vasos será difícil de visualizar o tecido cerebral e irá tornar-se clara. Após cerca de 20 min os efeitos de ET-1 irá diminuir e os vasos começará a dilatar gradualmente voltando ao diâmetro d…

Discussion

Em resumo, esta técnica de preparação de janela craniana é muito versátil uma vez que podem ser alterados para satisfazer as necessidades das várias experiências com pequenas modificações, ^{4, 5.} Por exemplo, conseguimos monitorado o fluxo sanguíneo cerebral em ramos específicos MCA usando a dopplerfluxometria a laser para se concentrar diretamente em uma artéria cerebral visualizado através de uma janela de crânio (Meca AP 2009 e 2011). Além disso, uma preparação semelhante com a incisão dur…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Inhalation anesthesia system	VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA	901806
Isoflurane anesthetic	Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA	1001936060
Small animal stereotaxic system	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	900
Non-rupture ear bars, rat	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	957
Rat gas anesthesia head holder	David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA	1929
BAT-12 microprobe thermometer	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	BAT-12
T/PUMP, Thermal blanket	Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA	T/PUMP, TP600
Metzenbaum Scissors	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	501254
Iris forceps	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	15915
Bulldog clamp retractors	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	14119-G
10 μl syringe 26-gaugue	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	SGE010RNS
Bovie, high temperature cautery kit	World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA	500392
Rat tooth forceps 0.12	Stotz	E1811
Micromotor drill	Stoelting, Wood Dale, IL, USA	51449
0.8 mm round drill bur	Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA	RS-6280C-1
STORZ Bonn suturing forceps	Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, USA
Nylon Suture, size 3.0	Oasis, Mettawa, IL, USA	MV-663
Cotton swabs	Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA	22-029-488
Puralube eye ointment	Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA	NC0138063
Electric hair clippers	Oster, Providence, RI, USA	78005-301
ET-1 diluted to 80 μM concentration in PBS	American Peptide, Sunnyvale, CA, USA	88-1-10A
Chlorhexidine, 2%	Agrilabs, St. Joseph, MO, USA	1040, Rev. 6-06, NAC No.: 10580322
Surgical microscope	Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA	Evolution xR6
Sony Handycam	Sony, Minato, Tokyo, Japan	HDR-SR12
Fiber optic illuminator	TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA	FO1–150
VLC media Player	(Paris, France)
Image J software	U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA