皮肤纹身作为一种新的方法DNA疫苗交货
Summary
皮肤纹身是一个强大的和安全的方式来传递DNA疫苗皮内。在这里，一个DNA质粒EGFP交付纹身实验室小鼠的皮肤，和EGFP在皮肤细胞中的表达，然后通过激光共聚焦显微镜检查。
Abstract
基于核酸的疫苗接种是一个主题的日益增长的兴趣，特别是质粒DNA（pDNA的）编码免疫学上重要的抗原。工程质粒DNA疫苗给药后，它被转录和翻译成免疫原的蛋白质，可以从免疫系统引起的反应。提供DNA疫苗的方法很多被调查，但每次送货路线都有自己的优点和缺陷。皮肤纹身是一种新的技术是安全的，符合成本效益，方便的。此外，穿刺针造成，也可以作为一种有效的佐剂。在这里，我们a）表现出增强型绿色荧光蛋白的质粒DNA编码的皮内交付（PCX-EGFP）在小鼠模型中，使用纹身的移动设备和b）在皮肤细胞中，使用共聚焦显微镜，确认有效的EGFP表达。
Protocol
1。质粒DNA纯化变换到DH5α 大肠杆菌感受态细胞的真核质粒DNA编码EGFP（PCX-EGFP）。空PCX载体也可以使用作为阴性对照。 文化和收获DH5α 大肠杆菌细胞和纯化的质粒DNA根据到的Qiagen公司EndoFree的质粒纯化手册“。 筛选pDNA的溶液通过0.22μm的PVDF无菌过滤器，并将其储存在-20℃直到使用。 2。纹身系统准备手持式单元和控制踏板连接到?…
Representative Results
在小鼠皮肤细胞中可以观察到在488nm和发射峰在509 nm处的激发峰的EGFP的表达。从1.875μg剂量的DNA，含有约3×10 17个拷贝的质粒，我们通常观察到10-20的EGFP信号在1厘米2纹身面积。这种相对较低的转染细胞的数量是先前的研究3的结果相一致。 EGFP表达（ 图1）提供的证据表明，EGFP质粒被输送到动物的皮肤细胞，使用的DNA纹身技术。 <p class="jove_content" fo:keep-togethe…
Discussion
DNA疫苗比传统的疫苗接种策略，被认为是更安全，因为它不要求操作，或暴露疫苗，活的或减毒的病原体。然而，DNA疫苗接种的结果，在很大程度上依赖于配送路线。皮肤是丰富的抗原呈递细胞，如朗格汉斯细胞和树突状细胞1，从而在一个理想的站点用于免疫的免疫原性和易于访问5,6。其结果是，皮内接种策略是用于DNA疫苗的最流行的选择之一。在这个视频中，DNA纹身是一个简?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想感谢所有成员的香港实验室和邓焰博士为的显微镜核心，办公室协同科学，NYUMC他们的援助和技术支持。这项工作是支持的试点补助金从纽约大学艾滋病研究中心（CFAR，美国国立卫生研究院授予AI027742）。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| pCX-EGFP plasmid DNA | Clontech | ||
| STEALTH Rotary Tattoo System | Worldwide Tattoo Supply | STEALTH-L | |
| Tattoo needles | Worldwide Tattoo Supply | 1207RSB | |
| EndoFree Plasmid Maxi Kit | Qiagen | 12362 | |
| 0.22 μm PVDF sterile filter | Millipore | SLGV013SL | |
| electrical hair trimmer | Commercially available | ||
| disposable safety razors | Commercially available | ||
| Silver Sulfadiazine Cream | Watson | NDC 0591-0810-55 | |
| Ketamine HCL | NDC 0856-2012-01 | ||
| Zylazine Sterile Solution | NADA 139-236 |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Chiu, Y., Sampson, J. M., Jiang, X., Zolla-Pazner, S. B., Kong, X. Skin Tattooing As A Novel Approach For DNA Vaccine Delivery. J. Vis. Exp. (68), e50032, doi:10.3791/50032 (2012).