一个<em在体内</em分析测试血管通透性
Summary
我们提出<em在体内</em>检测测试血管通透性。此测定是基于其扩散到间隙空间的染料和随后的可视化的静脉注射。
Abstract
这种方法是基于对小鼠作为试验动物模型中的伊文思蓝的静脉注射。伊文思蓝的染料结合白蛋白。在生理条件下血管内皮细胞是不透水的白蛋白，所以伊文思蓝结合蛋白在血管内仍然受到限制。在病理条件，促进血管通透性增加的内皮细胞部分失去他们的密切接触和内皮变得可渗透的小蛋白质如白蛋白。这种情况使组织中伊文思蓝外渗。一个健康的内皮防止在相邻的血管化组织的染料外渗。相比与内皮完整血管的器官，器官通透性增加，将呈现显着增加的蓝色着色。血管通透性的水平，可通过简单的可视化，或通过引入每毫克组织的控制，相对于实验动物/组织的定量测量的染料评估。两个鲍威此法的RFUL方面是它的简单和数量特征。伊文思蓝染料可以从组织中提取，通过孵育在甲酰胺中的特定数量的组织。伊文思蓝的最大吸光度是在620nm和最小值是在740 nm处的吸光度。通过使用伊文思蓝的标准曲线，可以被转换成光密度测量毫克染料捕获每毫克组织。统计分析应该用来评估血管通透性的显着差异。
Introduction
选择性渗透屏障的形成和维持所必需的适当的器官发育和性能1,2。内皮细胞系的血管管腔，形成一个半渗透的屏障，在血液和所有器官的间隙空间之间的选择性传输是必不可少的。通过紧的细胞-细胞间的交界处，严格控制的生长因子，细胞因子和其他应力相关分子3保持一个足够的渗透性屏障。内皮细胞屏障的破坏可导致增加的渗透性和血管渗漏。这些效果在各种疾病状态和下划线的分子信号的理解，需要多学科方法4,5。在这篇文章中，我们描述了一个在血管通透性使用的小鼠模型体内的方法来衡量。
我们所描述的测定法，也称为作为万里测定，是一种良好的established 在体内血管通透性的方法来测试。该测定是基于这样的事实，基底的生理条件下，白蛋白不穿过内皮屏障。对于白蛋白具有高亲和力，伊文思蓝，偶氮染料被注入在实验动物的血液流，并在生理条件下，它是预期要限制在血管内。当刺激血管通透性增加，无论是局部或全身，血管开始泄漏蛋白质，因此，也，伊文思蓝白蛋白结合。这样的结果在有可渗透的血管的组织，快速的蓝色着色。
在小鼠尾静脉注射成功的染料是关键的良好的实验结果。尾静脉注射技术需要广泛的实践，并在实验开始前应掌握。
血管通透性的年龄和体重的一个是高度依赖于IMAL，所以当比较不同小鼠品系是非常重要的，老鼠或其他考试科目相同的出生日期和重量有着密切的。其他因素影响的渗透性的内皮屏障的环境条件，如温度，湿度，和非常重要的是，在处理应力的鼠标。由于许多因素可以影响的实验的结果，它始终是可取的，该实验被重复执行至少三次和统计分析。
此法可用于或要比较的血管通透性已被转基因的小鼠，以及不同的遗传背景的小鼠。渗透性可以在存在或不存在刺激评估，根据调制的基因，该基因的功能。本试剂盒也可用于或血管通透性上测试不同的化合物的效果。
Protocol
Representative Results
Discussion
血管通透性是一个关键的血管状态的标记。血管通透性增加已被证明存在于几个全身性疾病，包括糖尿病，高血压，和自身免疫性疾病6,7,8。血管通透性增加已被证明是介导的剪切应力，生长因子，如血管内皮生长因子，成纤维细胞生长因子，炎症介质，如5 -羟色胺，组胺，缓激肽9。外渗的水和小分子被认为是发生通过血管内皮细胞之间的小开口。细胞-细胞间的交界处的强度有?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由美国国立卫生研究院，R01CA142928的资助。
Materials
| REAGENT | |||
| EVANS BLUE | SIGMA | E2129 | |
| FORMAMIDE | INVITROGEN | 15515-026 | |
| PBS | 0.2M Phosphate 1.5M NaCl pH 7.4 |
||
| EQUIPMENT | |||
| SPECTROPHOTOMETER | EPPENDORF | 952000006 | |
| MOUSE RESTRAINT DEVICE | HARVARD APPARATUS | 340012 | |
| SYRINGE | BD | 309659 | |
| NEEDLES | BD | 305106 | The gauge of the needle depends on the size of the animal. |
| BALANCE | DENVER INSTRUMENT | TP-64 |
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