घाव भरने की murine मॉडल
Summary
शारीरिक और pathophysiological सेटिंग्स में चिकित्सकीय यौगिकों का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि त्वचा के घाव भरने की एक murine मॉडल.
Abstract
घाव भरने और मरम्मत के मानव जीवन में होते हैं कि सबसे जटिल जैविक प्रक्रिया है. चोट के बाद, कई जैविक रास्ते सक्रिय हो जाते हैं. उदाहरण के लिए मधुमेह के रोगियों में पाया जाता है जो बिगड़ा घाव भरने, ऐसे विच्छेदन के रूप में गंभीर प्रतिकूल परिणामों को जन्म दे सकता है. घाव की मरम्मत को बढ़ावा देने कि उपन्यास एजेंटों विकसित करने के लिए एक बढ़ती हुई प्रोत्साहन, इसलिए, वहाँ है. इनमें से परीक्षण के इस तरह अक्सर अव्यावहारिक हैं जो सूअर, के रूप में बड़े पशु मॉडल तक ही सीमित कर दिया गया है. वे किफायती और यंत्रवत जांच के लिए अनुमति देता है जो आनुवंशिक हेरफेर करने के लिए उत्तरदायी हैं के रूप में चूहे, आदर्श preclinical मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं. हालांकि, यह मुख्य रूप से संकुचन के माध्यम से होता है के रूप में एक माउस में चिकित्सा मनुष्य के लिए मौलिक रूप से अलग है घाव. हमारे murine मॉडल घाव के चारों ओर एक पट्टी को शामिल करके इस पर काबू पा. घाव splinting करके, सुधार प्रक्रिया को बारीकी से जो दर्पण epithelialization, सेलुलर प्रसार और angiogenesis, पर तो निर्भर हैमानव घाव भरने की जैविक प्रक्रियाओं. स्थिरता और देखभाल की आवश्यकता होती है, जबकि इस murine मॉडल जटिल शल्य चिकित्सा तकनीक शामिल है और, उदाहरण के लिए, angiogenesis को बढ़ावा देने या सूजन को बाधित कर सकते हैं कि होनहार एजेंटों की मजबूत के परीक्षण के लिए अनुमति देता है. दो घावों को तैयार कर रहे हैं इसके अलावा, प्रत्येक माउस परीक्षण परिसर और एक ही पशु पर वाहन नियंत्रण दोनों के आवेदन को सक्षम करने, अपने स्वयं के नियंत्रण के रूप में कार्य करता है. अंत में, हम इंसानों के बराबर है जो घाव भरने के लिए एक व्यावहारिक, जानने के लिए आसान है, और मजबूत मॉडल प्रदर्शित करता है.
Introduction
बिगड़ा घाव भरने महत्वपूर्ण रुग्णता और दुनिया भर में मृत्यु दर के लिए जिम्मेदार है, यह मधुमेह 1,2 से ग्रस्त मरीजों के लिए विशेष रूप से सच है. मनुष्यों में, घाव भरने 3 अतिव्यापी महत्वपूर्ण है जो वहाँ में, प्रक्रियाओं का एक निरंतरता है. तुरंत बाद लोग घायल हो गए, सूजन प्रक्रियाओं शुरू कर रहे हैं. भड़काऊ कोशिकाओं सेल प्रसार, प्रवास और angiogenesis की प्रक्रिया को बढ़ावा देने वाले कारकों जारी. पुनः epithelialization और नए ऊतक गठन के बाद इस तरह के कोलेजन के रूप में मैट्रिक्स प्रोटीन की apoptosis और फिर से संगठन दोनों पर जोर देता है कि remodeling के एक चरण है.
घाव भरने की जटिलता वर्तमान में इन विट्रो में दोहराया और इस पशु मॉडल का उपयोग जरूरी नहीं किया जा सकता. तिथि करने के लिए, घाव चिकित्सा पढ़ाई चिकित्सा प्रक्रियाओं के बराबर है और मनुष्य के लिए तुलना कर रहे हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए, जैसे कि सूअर के रूप में बड़े पशु मॉडल, के लिए सीमित कर दिया गया है. हालांकि, बड़ी एनिमा उपयोग करइस तरह के अध्ययन के लिए रास घर के लिए मुश्किल हो सकता है और हमेशा व्यावहारिक 4 नहीं कर रहे हैं कर सकते हैं. प्रयोगशाला माउस आसानी आनुवंशिक 5-7 यंत्रवत जांच के लिए चालाकी से किया जा सकता है कि एक किफायती पशु मॉडल का प्रतिनिधित्व करता है. हालांकि, murine घाव संकुचन 8 की प्रक्रिया के कारण, मानव के लिए अलग तरह से चंगा. इस हिस्से में मानव में काफी हद तक अनुपस्थित है कि panniculus carnosus नामक एक व्यापक चमड़े के नीचे धारीदार मांसपेशी परत की वजह से है. चूहों में, इस मांसपेशी परत त्वचा स्वतंत्र रूप से गहरी मांसपेशियों के ले जाने के लिए अनुमति देता है और त्वचा निम्नलिखित घायल का तेजी से संकुचन के लिए जिम्मेदार है.
इस सीमा को पार करने के लिए, murine घाव भरने एक पट्टी का उपयोग करें (चित्रा 1) 8,9 द्वारा मानव घाव भरने को दोहराने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. इस वीडियो में हम फिर से epithelializa के मानव प्रक्रियाओं घाव संकुचन समाप्त और अधिक बारीकी से approximates कि splinted murine घाव मॉडल का प्रदर्शनtion और नए ऊतक गठन. इस मॉडल में panniculus carnosus शामिल है कि दो पूर्ण मोटाई excisions माउस के midline के प्रत्येक पक्ष पर पीठ, एक पर बनाया जाता है. एक सिलिकॉन पट्टी चिपकने की सहायता से घाव के आसपास रखा और पट्टी फिर बाधित टांके के साथ सुरक्षित है. प्रत्येक माउस जिससे पशु संख्या को कम करने, एक घाव का उपचार और अन्य वाहन पर नियंत्रण प्राप्त करने के साथ, अपने स्वयं के नियंत्रण के रूप में कार्य करता है. सामयिक अनुप्रयोगों के बाद, एक पारदर्शी पूर्णावरोधक ड्रेसिंग लागू किया जाता है. आगे सामयिक अनुप्रयोगों और / या घाव क्षेत्र 10,11 की माप के लिए आवश्यक है जब ड्रेसिंग हटाया जा सकता है. पर प्रयोगों के पूरा होने, घाव बंद, रूपात्मक वास्तुकला और neovascularization की डिग्री immunohistochemistry द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है. इस किफायती और मॉडल का प्रदर्शन करने के लिए आसान भी मधुमेह या अन्य pathophysiologies के संदर्भ में घाव भरने का आकलन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
यह त्वचा के घाव भरने की एक प्रयोगात्मक murine मॉडल है. इस मॉडल की एक महत्वपूर्ण विशेषता मनुष्य में होता है कि प्रक्रिया के लिए यह समान है, जिससे फिर से epithelialization और नए ऊतक गठन हो सकता है कि इतने घाव संकुचन को रोकन…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों को राष्ट्रीय स्वास्थ्य और ऑस्ट्रेलिया के चिकित्सा अनुसंधान परिषद (NHMRC) (: 632512 परियोजना अनुदान आईडी) से वित्तीय सहायता को स्वीकार करना होगा. लुईस डन एक नेशनल हार्ट फाउंडेशन कैरियर विकास फैलोशिप द्वारा एक NHMRC जल्दी कैरियर फैलोशिप और क्रिस्टीना Bursill द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Press-to-seal silicone sheeting 0.5 mm thick | Invitrogen | P18178 | Cut into “donuts” with external diameter of 1cm external, 0.5 cm internal diameter |
| Biopsy punch 5 mm | Steifel | BC-B1-0500 | To outline wound area to be excised |
| Vannas scissors 8.5 cm curved | World Precision Instruments | 501232 | For wound incision and excision |
| Dumonte #7b forceps, 11 cm | World Precision Instruments | 501302 | To grip skin when creating incision and excising skin |
| Graefe forceps, serrated 10cm | World Precision Instruments | 14142 | To help attach silicone splint to skin |
| Needle holder, smooth jaws, curved, 12.5 cm | World Precision Instruments | 14132 | |
| Malis forceps, smooth, straight, 12 cm | Codman and Shurtleff, Inc (J&J) | 80-1500 | To suture the silicon rings to the skin |
| Ruler, 0.5 mm gradation | n/a | ||
| Calipers 0.25 mm gradation | Duckworth and Kent | 9-653 | To measure wound area |
| Opsite FlexiFix transparent adhesive film. 10 cm x 1 m | Smith & Nephew | 66030570 | |
| Rimadyl (Carprofen) | Pfizer | 462986 |
Riferimenti
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