Artikeln beskriver en lätt enkel adaptiv<em> In vitro</em> Modell för att undersöka makrofager polarisering. I närvaro av GM-CSF/M-CSF är hematopoietiska stam / progenitorceller från benmärgen riktad in monocytisk differentiering, följt av M1 eller M2 stimulering. Aktiveringen status kan spåras genom förändringar i cellyteantigener, genuttryck och cell vägar signalering.
Artikeln beskriver en lätt enkel adaptiv in vitro modell för att undersöka makrofager polarisering. I närvaro av GM-CSF/M-CSF är hematopoietiska stam / progenitorceller från benmärgen riktad in monocytisk differentiering, följt av M1 eller M2 stimulering. Aktiveringen status kan spåras genom förändringar i cellyteantigener, genuttryck och cell vägar signalering.
Distinkt från klassiska inflammatoriska svar, makrofager som infiltrerar vävnad visar ofta polariserad aktivering status som spelar en avgörande roll i regleringen värdvävnad fysiologiska funktioner 1-8. Vid stimulering, kan makrofagaktivering sorteras i classic (M1) och alternativ (M2) aktivering 2, 4, 9. M1 makrofagaktivering beror på Toll-like receptors (TLR) och aktivering av nukleär faktor kappa B (NFkB) / c-Jun N-terminal kinas 1 (JNK1), vilket leder till produktion av inflammatoriska cytokiner, såsom TNF-α och IL- 1β och aktivering av iNOS som resulterar i ökad produktion av reaktiva syrespecies såsom nitrid oxid (NO) 10, 11. Däremot M2 makrofagaktivering rekryterar PPARy, PPARö, eller IL-4-STAT6 vägar, som leder till en alternativ, antiinflammatoriska (M2) aktivering som är associerad med uppreglering av mannosreceptor CD206, och arginas 1 (Arg1) 6, 12 – 14 </ Sup>.
Benmärg härledda makrofager (BMDM) presenterar ett ideal in vitro-modell för att förstå de mekanismer som styr polariseringen av aktiverade makrofager 15. Specifikt kan aktivering av M1 makrofager induceras av lipopolysackarider (LPS) stimulering, medan polarisering av M2 makrofager kan induceras genom IL-4 och / eller IL-13. Äldre benmärg makrofager och aktiverade makrofager kan identifieras genom flödescytometri analys för uttryck av ytantigener, inklusive CD11b, F4/80, CD11c, CD206, CD69, CD80 och CD86 9, 16, 17. Dessutom kan förändringar i cytokinproduktion och cell vägar signalering associerade med makrofag polarisering mätas genom kvantitativ RT-PCR och Western blotting, respektive. Sammanfattningsvis kan musbenmärg härledda makrofager tjäna som en relevant modell för att studera makrofager polarisering in vitro.
Vi rapporterar här en enkel och lätt anpassningsbar in vitro förfarande för att inducera aktivering av makrofager härledda från benmärgsstamceller. Detta förfarande kan användas för undersökning av mekanismer som ansvarar för polarisering av makrofager. Renheten av mogna makrofager som erhållits med hjälp av detta protokoll genomsnitt 95-99%, och inga ytterligare reningssteg förfaranden krävs. För att undersöka funktionen av specifika gener av intresse i samband med makrofag polarisering, ekto…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av American Heart Association (BGIA 7.850.037 till Dr Beiyan Zhou).
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
IMDM | Thermo Scientific | SH30259.01 | |
Fetal bovine serum | Invitrogen | 10438-026 | |
Murine GM-CSF | PeproTech | 315-03 | |
NH4Cl | StemCell Technologies | 7850 | |
L-929 | ATCC | CCL-1 | |
70 μm cell strainer | BD Biosciences | 352350 | |
10 x PBS | Thermo Scientific | AP-9009-10 | |
Anti-mouse CD11b-APC | eBioscience | 17-0112-81 | |
Anti-mouse F4/80-FITC | eBioscience | 11-4801-81 | |
Anti-mouse CD69-PE | eBioscience | 12-0691-81 | |
Anti-mouse CD86-PE | eBioscience | 12-0862-81 | |
Propidium Iodine | Invitrogen | P3566 |