La evaluación de la resistencia murino Función Arterial Utilizando miografía Presión
Summary
En miografía de presión, un pequeño segmento intacta de un recipiente está montado sobre dos pequeñas cánulas y se presuriza a una presión luminal adecuado. A continuación, se describe el método para medir la respuesta de vasodilatación del ratón 3<sup> Rd</sup> Orden arterias mesentéricas en c57 y sGCα<sub> 1</sub<sup> – / -</sup> Ratones utilizando miografía presión.
Abstract
Sistemas myograph presión son exquisitamente útiles en la evaluación funcional de las pequeñas arterias, presurizadas a una presión transmural adecuado. La condición fisiológica cerca logrado en miografía de presión permite la caracterización en profundidad de las respuestas intrínsecas a estímulos farmacológicos y fisiológicos, que pueden ser extrapolados al comportamiento in vivo del lecho vascular. Miógrafo de presión tiene varias ventajas sobre myographs de alambre convencionales. Por ejemplo, los vasos de resistencia más pequeños pueden ser estudiados a presiones intraluminales estrictamente controladas y fisiológicamente relevante. A continuación, se estudia la posibilidad de 3 ª arterias mesentéricas orden (3-4 mm de largo), preconstricted con fenilefrina, a la vaso-relajación en respuesta a la acetilcolina. Arterias mesentéricas se montan en dos cánulas conectadas a un sistema de presurizado y sellado que se mantiene a presión constante de 60 mm Hg. El diámetro de la luz y el exterior del recipiente son continuously registraron con una cámara de vídeo, lo que permite la cuantificación en tiempo real de la vasoconstricción y la vasodilatación en respuesta a la fenilefrina y la acetilcolina, respectivamente.
Para demostrar la aplicabilidad de miografía de presión para estudiar la etiología de la enfermedad cardiovascular, se evaluó la función vascular dependiente del endotelio en un modelo murino de la hipertensión sistémica. Los ratones deficientes en la subunidad α 1 de la guanilato ciclasa soluble (sGCα 1 – / -) son hipertensos cuando en un (S6) de fondo 129S6 (sGCα 1 -/-S6) pero no cuando en un C57BL / 6 (B6) fondo (sGCα 1 -/-B6). Usando miografía presión, se demuestra que sGCα resultados 1-deficiencia en deterioro vasodilatación dependiente del endotelio. La disfunción vascular es más pronunciada en sGCα 1 -/-S6 que en sGCα 1 -/-B6 ratones, probablemente Contributing a la presión arterial más alta en sGCα 1 -/-S6 que en sGCα 1 -/-B6 ratones.
Miografía de presión es una técnica relativamente simple, pero mecánicamente sensible y útil que se puede utilizar para evaluar el efecto de diversos estímulos de contracción y la relajación vascular, aumentando así nuestra comprensión de los mecanismos que subyacen a la enfermedad cardiovascular.
Introduction
Myograph sistemas de presión se utilizan para medir la función fisiológica y las propiedades de las pequeñas arterias, venas y otros vasos. Un pequeño segmento intacto de una arteria o vena está montado sobre dos cánulas de vidrio pequeñas y se presuriza a una presión luminal adecuado, permitiendo que el recipiente para mantener la mayoría de sus características in vivo (Figuras 1 y 2). La condición fisiológica en cerca de un miógrafo de presión refleja el comportamiento in vivo de la cama vascular, lo que permite la investigación de las propiedades intrínsecas (por ejemplo, tono miogénico) de vasos aislados. Algunas de las ventajas de miografía de presión sobre miografía de alambre, donde la contracción muscular se evaluó mediante acoplamiento mecánico directo a un transductor de fuerza 1, incluyen (i) que las micro arterias de resistencia, que definen la resistencia global desarrollado en el sistema vascular, pueden ser estudiados, mientras que los myograph alambre se limita a grandes arterias de conducción, (ii) tsombrero el riesgo de dañar el endotelio se reduce ya que los cables no necesitan ser pasado a través de la luz del vaso, (iii) que la forma natural del vaso se mantiene mejor, y (iv) que la dimensión recipiente puede ser estudiado en una amplia gama de presiones o esfuerzos cortantes 2.
El estudio de microvasos puede ser más informativo que el estudio de grandes arterias de conducción para ayudar a comprender los mecanismos fisiopatológicos y moleculares que contribuyen al tono vascular alterado en las enfermedades cardiovasculares como la hipertensión. Por ejemplo, deterioro de la función endotelial asociada con la alimentación de ratones con una dieta alta en grasas durante 8 semanas se pudo demostrar en 2 º de orden arterias mesentéricas 3 pero no en anillos de aorta (Figura 3). Otra ventaja de miografía de presión que es intrínseca constricción miogénica del recipiente a presión está presente, y que el papel y la función del endotelio en este fenómeno puede ser estudiado. En este sentido, descrIbe el uso de un miógrafo de presión para estudiar la reactividad vascular de ratón mesentéricos 3 ª arterias de resistencia de la orden en un entorno de óxido nítrico alterada (NO)-GMPc señalización.
Protocol
Representative Results
Discussion
Los ratones son el modelo experimental de elección para muchos investigadores, en parte debido a la posibilidad de introducir modificaciones genéticas, generando de esta manera los modelos de ratón para la fisiopatología humana. El estado vasoactivo de pequeña resistencia, pero no de grandes vasos de conducción define en gran medida la regulación del flujo de sangre a través del sistema vascular 11. El tamaño de las arterias de resistencia en animales pequeños, tales como ratones, se evita el uso de…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a los Dres. Paul Huang y Dmitriy Atochin para el uso del DMT presión myograph y los Dres. Binglan Yu y Chong Lei de proporcionar los ratones alimentados con la dieta alta en grasas o una dieta estándar.
FUENTE DE FINANCIACIÓN
Este trabajo fue apoyado por una subvención del 10SDG2610313 científico de la American Heart Association (que ES Buys), y un programa de becas Miles 50mo Aniversario Shore Eleanor y para Académicos en Medicina de la Escuela Médica de Harvard (que ES Buys).
Materials
| Name | Company | Cataloge No. |
| NaCl | Fisher Scientific | BP358 |
| CaCl2 (2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 |
| KCl | Sigma | P9333 |
| MgSO4 | Fisher Scientific | M65-500 |
| KH2PO4 | Sigma | P3786 |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | BP328 |
| NaOH | Fisher Scientific | S318 |
| D-Glucose | Sigma | G8270 |
| EDTA | Fisher Scientific | BP121 |
| HEPES | Sigma | H3375 |
| Phenylephrine | Acros Organics | AC20724 |
| Acetylcholine | Sigma | A6625 |
| Pressure Myograph System | DMT |
Riferimenti
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