형광 공 초점 Videomicroscopy를 사용하여 종양 혈관의 생체 내 이미징
Summary
이 논문에서는 동적 조영 증강 형광 videomicroscopy를 사용하여 생체 내에서 종양의 미세 혈관을 분석하는 방법을 제시한다. 두 정량적 파라미터를 획득 하였다 : 기능성 종양 혈관을 반영 모세관 밀도 및 내피 벽 leakiness 반사 인덱스 누설.
Abstract
광섬유 번들 Fibered 공 초점 형광 생체 촬상 형광 공 초점 현미경과 같은 원리를 사용한다. 이 광섬유를 통해 원위치 요소에 형광을 자극 한 후 동일한 광섬유를 통해 방출 된 광자의 일부를 기록 할 수있다. 광원은 섬유 다발 내의 요소를 통해 여기 광을 전송하고 샘플을 통해 스캔과 같은, 화소에 의해 화상의 화소를 다시 레이저이다. 이것은 스캔이 전용 이미지 프로세싱 소프트웨어와 조합함으로써, 매우 빠르고 같이, 12 프레임 / 초의 주파수 실시간 화상을 얻을 수있다.
우리는 공 초점 형광 videomicroscopy 장치를 이용하여 정량적으로 모세관 형태와 기능을 특성화하는 기술을 개발했다. 우리의 실험에서 첫 번째 단계는 모세관 네트워크를 시각화하는 종양의 사분면에서 5 초 영화를 기록하도록 하였다. 모든 영화는 (소프트웨어를 사용하여 처리 된 ImageCell, 선택 직경 (우리의 경우 10 ㎛)의 주위에 혈관의 자동 분할을 수행 마우나 케아 기술, 파리, 프랑스). 따라서, 우리는 전체 혈관 영역과 화상의 전체 영역 사이의 비율이다 '기능적 모세관 밀도'정량화 있었다. 이 파라미터는 보통 병리 도구를 사용하여 측정 된, 미세 혈관 밀도에 대한 대리 마커이었다.
두 번째 단계는 간질로 모세관 벽을 통해 고분자 조영제의 누출을 정량화하기 20 분에 걸쳐 종양의 영화를 기록하는 것이었다. 혈관 그 이상의 간질에서 신호 강도의 비를 측정함으로써, '인덱스 누설'모세관 투과성에 대한 대리 마커로서 작용 얻었다.
Introduction
혈관 신생은 기존 혈관으로부터 새로운 혈관의 형성을 포함하는 복잡한 과정 일이다. 동맥, 모세 혈관, 세정맥과 구성 조직의 미세 혈관의 병리학 적 변화는,, 암, 염증, 당뇨병과 같은 질병의 넓은 범위에 연루되어있다. 정량적 미세 혈관의 구조와 기능을 평가하는 방법을 개발하는 것이 필수적이다. 영상은 실시간 및 생체 내에서, 비 – 또는 마이크로 – 침습적 방식으로 미세 혈관의 연구를 가능하게하고, 동일 동물이 경시 반복 측정.
현재 동적 조영 증강 (DCE) 영상 (3)은 일반적으로 조직의 미세 혈관을 평가하는 데 사용됩니다. 동적 조영 증강 영상은 시간이 지남에 따라 정맥 주사 추적의 생체 분포를 따르는 기술이다. 이번 인수에서 정량적 매개 변수는 조직의 혈관 신생을 반영 추출 할 수 있습니다. DCE 영상대부분 CT, MRI 또는 초음파로 사용되어왔다. 그러나 이러한 영상 기술은 특정 실험 장치의 사용과 그 이외의 해상도가 가장 자주 거시적 남아 있기 때문에, 미세 혈관의 직접적인 관찰을 허용하지 않는다.
이 논문에서, 우리는 fibered 촛점 videomicroscopy으로, 동적 조영 증강 광학 이미징을 사용하여 미세한 규모 및 생체 내에서 종양 혈관을 연구하기 위해 제안한다. 우리는 그 분자량 및 조직의 내피 세포의 특성을 연구 4에있어서, 간질로 내피 장벽을 통한 혈관 누수 또는 내에서만 남아 고분자 조영제 (FITC-덱스 트란) 사용. 이 누출 및 간질에 축적에 의해, 제대로 혈관을 서술하여 모두 미세 혈관 구조의 연구는, 모세 혈관 투과성을 허용했다.
Protocol
Representative Results
Discussion
종양 미세 혈관의 연구는 종양의 성장, 보급 및 치료 1에 대한 응답의 병태 생리를 이해하는데 필수가되고있다. 광학 영상은 형광 조영제를 이용하여 모세 혈관을 관찰 및 형태학 (기능 모세관 밀도) 및 기능 (인덱스 누설) 파라미터를 정량화하는 데 사용할 수있는 기술 중 하나이다.
우리는이 연구에 사용 된 형광 현미경 영상은 장점과 한계를 모두 가지고 있습니다. …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Insulin serynge Myjector 1ml 29G |
Terumo Europe | BS-05M2913 | |
| Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa | Sigma-Aldrich | 01619HH | 100 mg/mL diluted in saline |
| Fibered confocal videomicroscopy | Cellvizio – MaunaKea Technologies | ||
| Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000 | Leica Microsystems | LSU-488 | Store at 4 °C |
| Probe ProFlexTM Z | MaunaKea Technologies | ||
| Mosaicing software | MaunaKea Technologies | ||
| Vessel detection software | MaunaKea Technologies |
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