Rapid High Throughput amilosio Determinazione in liofilizzati campioni dei tuberi
Summary
Questo protocollo descrive un alto attraverso mettere metodo colorimetrico che si basa sulla formazione di un complesso tra iodio e catene di molecole di glucosio in amido. Iodio forma complessi sia con amilosio e amilopectina all'interno di lunghe catene. Dopo l'aggiunta di iodio ad un campione di amido, il massimo assorbimento di amilosio e amilopectina avviene a 620 e 550 nm, rispettivamente. Il rapporto amilosio / amilopectina può essere stimato dal rapporto tra i valori di assorbanza 620 e 550 nm e confrontandoli con una curva standard in cui specifici noto concentrazioni sono tracciati rispetto ai valori di assorbimento. Questo alto rendimento, metodo economico è affidabile e riproducibile, permettendo la valutazione di grandi popolazioni di cloni di patata.
Abstract
Questo protocollo descrive un alto attraverso mettere metodo colorimetrico che si basa sulla formazione di un complesso tra iodio e catene di molecole di glucosio in amido. Iodio forma complessi sia con amilosio e amilopectina all'interno di lunghe catene. Dopo l'aggiunta di iodio ad un campione di amido, il massimo assorbimento di amilosio e amilopectina avviene a 620 e 550 nm, rispettivamente. Il rapporto amilosio / amilopectina può essere stimato dal rapporto tra i valori di assorbanza 620 e 550 nm e confrontandoli con una curva standard in cui specifici noto concentrazioni sono tracciati rispetto ai valori di assorbimento. Questo alto rendimento, metodo economico è affidabile e riproducibile, permettendo la valutazione di grandi popolazioni di cloni di patata.
Introduction
Circa il 80% del peso fresco di un tubero di patata è acqua, quasi tutta la materia secca restante è amido 1. La maggior parte dell'amido (70%) è costituito da amilopectina, mentre il resto è amilosio. Il rapporto tra amilosio e amilopectina è la proprietà più importante che influenza le proprietà fisiche di amido. Amilosio è una catena alfa 1-4 glucosio lineare, mentre l'amilopectina è un lineare alfa 1-4 catena con alfa 1-6 rami 2. Metodi quali iodio vincolante, calorimetria a scansione differenziale (DSC), dimensioni elevate prestazioni esclusione cromatografia (HPSEC) e interazioni concanavalina A sono stati sviluppati per la determinazione dell'amido in diverse specie coltivate 3,4. Ogni protocollo richiede competenze e attrezzature speciali, rendendo difficile scalare fino a quantificare i numerosi campioni alla volta. Il metodo che presentiamo qui è un protocollo modificato da Hovenkamp-Hermelink et al. 5 che è una lunghezza d'onda dual vincolante iodiometodo basato sulla granuli di amido colorati. I vantaggi di questo metodo rispetto altri includono la determinazione amilosio da amido greggio purificandolo e l'utilizzo del sistema doppia lunghezza d'onda per aumentare la precisione del metodo 4,6.
Protocol
Representative Results
Discussion
Contenuto di amilosio nei tuberi di patata varia tipicamente 20-35% 7,8. Se la maggior parte dei valori sono fuori di questo intervallo, considerare questi possibili errori: 1) i dati grezzi sono stati usati al posto dei dati blanking per la costruzione della curva standard amilosio / amilopectina; 2) i dati grezzi sono stati usati al posto dei dati blanking per la determinazione del amilosio / rapporti di amilopectina dai campioni di patate, oppure 3) l'acqua utilizzata per l'analisi non era abbastan…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finanziamento per questa ricerca è stato fornito in parte dal Programma di Ricerca Associate USDA-ARS e il Comitato Crop Germoplasma USDA.
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
Riferimenti
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