Questo articolo presenta una metodologia completa per preparare e conservare In vitro Acuta fettine di ippocampo di topi adulti. Questo protocollo permette la registrazione di potenziamento a lungo termine di lunga durata molto stabile (LTP) per più di 8 ore con un tasso di successo del 95%.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Miglioramento della preparazione e la conservazione di fette mouse ippocampo per una registrazione molto stabile e riproducibile di potenziamento a lungo termine
In questo articolo
Sommario
Abstract
Potenziamento a lungo termine (LTP) è un tipo di plasticità sinaptica caratterizzata da un aumento della forza sinaptica e crede di essere coinvolti nella codifica della memoria. LTP suscitato nella regione CA1 di fettine di ippocampo acute è stata ampiamente studiata. Tuttavia i meccanismi molecolari alla base della fase di questo fenomeno manutenzione sono ancora poco conosciuti. Questo potrebbe essere dovuto in parte alle diverse condizioni sperimentali utilizzate da diversi laboratori. Infatti, la fase di mantenimento LTP è fortemente dipendente da parametri esterni come ossigenazione, temperatura e umidità. Esso dipende inoltre parametri interni come orientamento del piano di tranciatura e vitalità fetta dopo dissezione.
L'ottimizzazione di tutti questi parametri permette l'induzione di un potenziamento molto riproducibile e molto stabile a lungo termine. Questa metodologia offre la possibilità di esplorare ulteriormente i meccanismi molecolari coinvolti nella crescita stabilein forza sinaptica in fettine di ippocampo. Si evidenzia anche l'importanza delle condizioni sperimentali in vitro in indagini di fenomeni neurofisiologici.
Introduzione
Al giorno d'oggi, non vi è limitata comprensione di come le memorie complesse vengono memorizzate e richiamate a livello di circuito neuronale. Tuttavia, un'ipotesi unificante di memoria è disponibile e ampiamente riconosciuti: memorie sono memorizzati come cambiamenti nella forza delle connessioni sinaptiche tra i neuroni nel sistema nervoso centrale. Di per sé, la ricerca sulla plasticità sinaptica ha largamente beneficiato di due scoperte svolta. (1) In un esperimento seminale, Bliss e Lomo 1, utilizzando il coniglio anestetizzato intatta, trovato che la consegna di una breve alta frequenza (1 sec, 100 Hz) impulso alla via perforante dell'ip....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutte le procedure sugli animali sono stati eseguiti in conformità con il National Institutes of norme sanitarie per la cura e l'uso di animali nella ricerca e con l'accordo del comitato etico locale.
1. Preparazione del Artificial liquido cerebro-spinale
Lo stesso supporto utilizzato per sezionare, tagliare e perfusione fette (1 ml / min) durante il periodo di riposo e le registrazioni elettrofisiologiche. Questo supporto è composto da 124 mM NaCl, 4.4 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 1 mM NaH 2 PO 4, 2,5 mM CaCl 2, 1,3 mm MgSO 4 e 10 mm D-glucosio.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Questa metodologia è stata utilizzata per analizzare le proprietà di potenziamento a lunga durata a lungo termine indotta in fettine ippocampali acute da adulti topi C57BL/6J (JANVIER SAS, Francia) 14. Sorprendentemente, il miglioramento delle condizioni sperimentali ha portato ad un nuovo modo di guardare alla LTP. Abbiamo dimostrato che la crescita di lunga durata in forza sinaptica non ha richiesto la sintesi di nuove proteine.
Qui, dimostriamo che l'induzione LTP dipende f.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Abbiamo sviluppato nel nostro laboratorio un protocollo risultante dalla combinazione dei metodi sviluppati e utilizzati da altri laboratori aventi un grande esperienza in registrazioni LTP 11,17. Questo protocollo è atto ad adulto ippocampo mouse e può essere utilizzato in animali di qualsiasi età e qualsiasi sfondo genotipo. Esso permette anche l'analisi LTP in topi transgenici sviluppare malattie neurodegenerative come il morbo di Alzheimer 18,19.
L'utilizzo .......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Ringraziamo Bernard Foucart per l'assistenza tecnica. Questo lavoro è stato sostenuto dal Fondo belga per la Ricerca Scientifica (FRS-FNRS) e dal Fondo regina Elisabetta per la ricerca medica. Agnès Villers è assegnista di ricerca presso il Fondo belga per la Ricerca Scientifica.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagent/Material | |||
| NaCl | Sigma - Aldrich | S7653 | |
| NaHCO3 | Sigma - Aldrich | S8875 | |
| KCl | Sigma - Aldrich | P9333 | |
| D-glucosio | Sigma - Aldrich | G7528 | |
| NaH2PO4 | Sigma - Aldrich | S9638 | |
| MgSO4 1M | Sigma - Aldrich | 63126 | |
| CaCl2 | Sigma - Aldrich | C4901 | |
| Carbogen | Air Liquide (Belgio) | ||
| Capillari | WPI, Inc. (Regno Unito) | TW150-4 | |
| Elettrodi stimolanti | FHC (USA) | CE2B30 | |
| Strumenti chirurgici | FST (Germania) | ||
| Carta da filtro 84 g/m2 | Sartorius | FT-3-105-110 | |
| Mesh | Lycra | 15 den | |
| Colla | UHU | plus endfest300 | |
| Instrument | |||
| Amplifier | WPI, Inc. (UK) | ISO-80 | |
| Interfaccia camera di registrazione | FST (Germania) | ||
| Pompe peristaltiche | Gilson (USA) | Minipuls 3 | |
| Regolatore di temperatura | Università di Edimburgo | www.etcsystem.com | |
| Tritatutto | Mcllwain | ||
| Stimolatori | Grass (USA) | S88X + SIU-V | |
| Analisi del programma | WinLTP | www.winltp.com | |
| Micromanipolatori | Narishige | MM-3 e MMO-220A | |
| Microscopio operatorio | Convertitore A/D Leica Microsystem | ||
| National Instruments | NIPCI-6229 serie |
Riferimenti
- Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J. Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
- Douglas, R. M., Goddard, G. V.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
