Gavage poisson zèbre pour adultes

Summary

L'utilisation croissante de poisson zèbre comme modèle animal nécessite le développement de méthodes efficaces pour la livraison de quantités connues de composés et des solutions. La procédure décrite ci-dessous permet de gavage pour l'administration orale de volumes précis de solution fiable, sûre et efficace pour le poisson zèbre adulte.

Abstract

Le poisson zèbre est devenu un important modèle in vivo pour la recherche biomédicale. Des méthodes efficaces doivent être développées et utilisées pour délivrer des composés ou des agents dans les solutions pour la recherche scientifique. Les méthodes actuelles d'administration de composés oralement au poisson zèbre adultes sont inexacts en raison de la variabilité de la consommation volontaire par les poissons. Une procédure gavage a été développé pour fournir des quantités précises d'agents infectieux à poisson-zèbre pour l'étude dans la recherche biomédicale. Poisson zèbre adulte de plus de 6 mois ont été anesthésiés avec 150 mg / L de tampon MS-222 et gavées avec 5 pi de solution en utilisant un tube de l'implantation par cathéter flexible attaché à une coupe de pointe de l'aiguille de 22 G. Le tube flexible a été abaissé dans la cavité buccale du poisson zèbre jusqu'à ce que la pointe du tube étendue au-delà des branchies (environ 1 cm). La solution a ensuite été injecté lentement dans le tractus intestinal. Cette méthode a été efficace 88% du temps, avec des poissons récupération sans incident. Cetteprocédé est également efficace comme une personne peut gavage 20-30 poisson en une heure. Cette méthode peut être utilisée pour administrer précisément agents infectieux pour les études sur les maladies, ou des études d'autres composés chez le poisson zèbre adulte.

Introduction

Les méthodes actuelles d'administration de composés oralement au poisson zèbre comprennent des composés qui administrent top couché sur alimentation, mélangés à la ration de gélatine ^1, bioencapsulated dans de la saumure de crevettes ^2, mélangés avec lipidiques régimes encapsulées ^3, cire perles de pulvérisation ⁴ et via des régimes à base de gluten. ⁵ Limites de ces modes d'administration par voie orale comprennent les taux de lessivage élevés et la consommation incomplète ou imprévisible composé de poisson. Ces variables sont problématiques parce que dans les études sur les maladies infectieuses, sachant la dose infectieuse administré au poisson peut être critique pour le succès de l'étude. En outre, des travaux antérieurs ont montré que certains composés administrés dans des bains d'eau causent lésion toxique pour les poisson-zèbre branchies avant que les effets intestinaux qui peuvent être à l'étude se produisent. ⁶

Gavage est une méthode standard utilisée pour d'autres espèces d'animaux de laboratoire à administrer des quantités précises d'un produit avec akconcentration de nown pour l'étude de la recherche biomédicale et pharmaceutique. C'est seulement récemment que des méthodes de gavage poisson zèbre été décrits dans la littérature. Une technique décrite est une méthode de deux personnes à l'aide d'une gaine de cathéter 24 G attaché à une pipette ul 2-20 de livrer 5 pi de solution. ⁷ La méthode décrite a eu un taux de mortalité de 8,7% et de 39% sur le premier et le second procès, respectivement, plus de la mortalité a été attribuée à des femelles gravides. La seconde technique gavage décrit les seringues usagées gavage épointées à administrer 5 pi de solution à medakas (Oryzias latipes). ⁸ Information sur la mortalité n'a pas été fourni et le processus exact d'effectuer le gavage n'a pas été décrite. Selon le Conseil canadien de protection des animaux et le poisson zèbre laboratoire, jusqu'à 1% du poids du corps du poisson peut être administré par gavage. ^9,10 Notre objectif était de développer une méthode reproductible, sûre et efficace de livrer des volumes précis de comlivres par voie orale pour le poisson zèbre adulte des deux sexes et à tous les stades de la reproduction. Cette procédure serait applicable pour toute étude dans laquelle l'administration orale d'un composé précis est nécessaire.

Protocol

1. Préparation de la solution anesthésique Préparer une solution de 150 mg / L de MS-222 dans de l'eau du système soit à partir d'une solution mère ou de la forme pulvérulente. Vérifier le pH à l'aide d'un pH-mètre. Tampon avec du bicarbonate de sodium que nécessaire jusqu'à ce que le pH est compris entre 7-7,5. Préparer un réservoir d'eau de système libre de MS-222 pour le poisson à récupérer po Le temps de récupération est généralem…

Representative Results

Les deux sexes de poissons, y compris les femelles gravides ont été gavés avec succès (Figure 1). Une procédure succès prend moins d'une minute sans liquide vu sortant des ouïes ou la bouche. Le tube pénètre facilement, sans force, sans artérielle observée lors du retrait du cathéter. La procédure est rapide, ce qui nécessite environ 10 min de gavage de 3 à 4 poissons, avec une moyenne de 30-45 secondes par poisson. Le poisson zèbre ne doit pas être par …

Discussion

Importance

Cette technique est une amélioration et offre plusieurs avantages par rapport aux deux techniques décrites précédemment pour gavage poisson zèbre adulte. Tout d'abord, l'utilisation d'une éponge pour retenir le poisson permet à une personne d'effectuer la procédure, par opposition à une technique décrite précédemment nécessitant deux personnes. ⁷ Deuxièmement, les tubes de l'implantation par cathéter est plus souple que cathéters intrave…

Materials

			Equipment
A sponge
1-cc luer lock syringe	Becton Dickinson & Co
22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut)	Braintree Scientific, Inc.
1 22-G needle (cut, if needed)	Becton Dickinson & Co
pH meter	Hanna probe
1 scalpel blade
			[header]
			Reagent/Material
MS-222 (Finquel)	Argent Laboratories