一种协议,用于非侵入性导管内输送水性试剂的小鼠乳腺进行说明。该方法利用局部注射到专门针对乳腺导管乳腺的乳头。这种技术可适于多种化合物,包括的siRNA,化疗剂和小分子。
在此我们描述了一个协议,提供各种试剂通过导管注射小鼠乳腺。局部给药和敲低内的乳腺上皮细胞的基因已经难以实现由于缺乏适当的靶向分子,是独立的,如怀孕和哺乳期的发育阶段的。本文中,我们描述了用于试剂的局部递送到乳腺在通过导管注射到小鼠的乳头在成年期的任何阶段的技术。注射剂可以在活体小鼠中进行,在麻醉状态下,并允许非侵入性和局部药物输送到乳腺。此外,注射剂可以重复在几个月而不损坏乳头。重要的染料,如伊文思蓝是来学习的技术非常有帮助。经导管内注射蓝色染料,整个导管树变得肉眼可见的。此外,荧光标记试剂也允许在乳腺内的可视化和分布。这种技术可适于多种化合物,包括的siRNA,化疗剂,和小分子。
小鼠乳腺是由一个复杂的导管肺泡树收敛到在乳头中央管。在小鼠以及人类中,大多数乳腺肿瘤起源于上皮细胞衬乳管。目前可用的治疗包括静脉化疗,放疗和手术治疗。局部导管的治疗已经探索1-3,并提供在减少的毒性和副作用方面显著优点。然而,在这些可以更广泛地应用于一些挑战依然存在。在小鼠乳腺执行程序相媲美的能力,有利于导管内干预的表征。这里,我们提出的递送试剂的直接进入小鼠乳腺导管的非侵入性方法。
导管内输送的两种乳腺癌患者和小鼠模型的化疗剂已被证明是没有证据的高效全身毒性或长期的病理改变3-6。此外,肿瘤细胞注射及癌基因的慢病毒载体传递已经显示出以前通过导管注射7-10是可行的。
除了药物释放,这个过程是乳腺基因通过导管内注射的siRNA沉默本地有用。注射少量的siRNA的解决方案是在不改变乳腺的解剖学和生理学有效。在我们的实验室,我们最近表明在转基因小鼠的关键调解人的基因,自发发展造成预防肿瘤进展(Brock 等人 ,未发表)的乳腺肿瘤成功的沉默。我们已经能够以没有明显的组织损伤或毒性重复每两周注射到相同的乳头最多7次在2周的时间间隔。
导管内注射可在成年小鼠,以解决发育定时孕期,哺乳期和退化或肿瘤的发生和发展过程中的目标后期阶段有关乳腺发育opmentally特定的事件。处女女年仅8周龄时已注入非侵入性在我们的实验室。
转基因和基因敲除小鼠是研究各个基因在乳腺癌体内的作用非常宝贵的工具。然而,这是昂贵和费时的,以产生这些动物和基因敲除通常是无处不在的,有时会令我们无法认识到基因对乳腺的具体效果。因此,靶向敲低会减轻在其他器官中的非特异性的副作用和毒性问题。
导管内注射的siRNA这里提出使在小鼠乳腺的局部基因敲除。它是一个快速的方法靶向和局部药物递送到乳腺不限于siRNA递送。这样的乳腺特异性药物递送避免了非特异性的副作用和毒性的其他器官,并允许基因变异的研究在乳腺发育和乳腺肿瘤的形成过程中的特定时间点。没有证据显示硅核糖核酸颗粒在非注射腺,肝脏或其他器官提供了进一步的证据表明,这种方法提出了在乳腺局部的基因敲除的优选方式。此外,胰管内注入可以每周或每两周重复在几个月内以允许长期监测的治疗剂。
这种技术开辟了可能性用于测定的导管内输送各种试剂对小鼠乳腺导管。在充分表征的小鼠模型中局部递送进展加快的非侵入性的应用中,有针对性的在人类中的治疗策略。
The authors have nothing to disclose.
作者要感谢迈克尔·戈德堡为制备稳定siRNA溶液和希瑟·托宾她与动物的援助。这项研究是由美国国防部创新奖W81XWH-08-1-0659为台达电子。 SK的博士后训练是由苏珊科曼摹基金会(KG101329)的支持。作者要感谢克里斯汀约翰逊准备原理图。
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |