Murino Cervical Trasplante Cardiaco Modelo Usando una técnica de Cuff Modificado
Summary
El modelo de trasplante de corazón murino de cuello uterino es muy adecuado para inmunológica así como estudios de la lesión de reperfusión de isquemia. Hemos modificado el procedimiento utilizando una técnica de manguito no sutura y realizado más de 1.000 trasplantes de éxito con este enfoque.
En esto, proporcionamos detalles adicionales de esta técnica para complementar el vídeo.
Abstract
Los modelos de ratón son de especial interés en la investigación desde una amplia variedad de anticuerpos monoclonales y comercialmente definen endogámica y las cepas knockout están disponibles para llevar a cabo mecanicista en estudios in vivo. Mientras que los modelos de trasplante de corazón utilizando una técnica de sutura se desarrolló por primera vez con éxito en ratas, la traducción a un equivalente murino utilizado igualmente generalizada nunca se logró debido a la complejidad técnica del procedimiento de microcirugía. En contraste, las técnicas del manguito no sutura, también desarrolladas inicialmente en ratas, se adaptaron con éxito para su uso en ratones de 1-3. Esta técnica de revascularización implica dos pasos principales I) eversión del buque receptor sobre un manguito de polietileno; II) tirando del buque cedente sobre el buque receptor antes evertido y manteniéndolo en su lugar con un empate circunferencial. Esto asegura una continuidad de la capa endotelial, tiempo de funcionamiento corto y muy altas tasas de permeabilidad 4.
t "> Utilización de esta técnica para la anastomosis vascular que lleva a cabo más de 1.000 trasplantes de corazón cervicales con una tasa de éxito del 95%. Para arterial flujo de la arteria carótida común y el arco aórtico proximal se anastomosa dando como resultado una perfusión retrógrada del corazón trasplantado. Para el drenaje venoso de la arteria pulmonar del injerto se anastomosa con la vena yugular externa del receptor 5.En esto, proporcionamos detalles adicionales de esta técnica para complementar el vídeo.
Introduction
El trasplante cardíaco representa el tratamiento de elección para los pacientes que sufren de diferentes enfermedades cardíaca terminal. Los avances en las técnicas quirúrgicas, la profilaxis más eficaz de las infecciones y nuevas pautas de inmunosupresión como resultado notablemente mejorada resultado del trasplante de órganos 6. Sin embargo, la supervivencia del injerto a largo plazo no ha mejorado rigurosamente en los últimos años 7. El rechazo crónico, que se caracteriza por la arteriosclerosis de trasplante sigue siendo un obstáculo importante para la supervivencia del injerto a largo plazo 8-11.
El modelo de trasplante heterotópico de corazón en ratones proporciona una herramienta importante y válido para el análisis de mecanismo inmunológico durante aguda, así como el rechazo crónico 12-15.
Hasta la fecha el modelo de trasplante más frecuente sigue siendo el abdominal trasplante de corazón de ratón utilizando la técnica de sutura. La aorta ascendente del corazón del donante se anastomosa a la unabdominal aorta y la arteria pulmonar se anastomosa a la vena cava inferior del receptor. Gran parte de la dificultad microquirúrgica del modelo de sutura se basa en el pequeño tamaño de los vasos, que se suturan 16,17.
En contraste con el modelo de sutura el corazón se coloca en la región del cuello del recipiente donde la vena yugular externa se anastomosa a la arteria pulmonar y la arteria carótida común la aorta del donante.
La razón de ser del desarrollo del modelo de trasplante de corazón cervical utilizando la técnica del manguito era tener un modelo animal, que permite lograr altas tasas de éxito con las habilidades básicas de microcirugía que permitirán una amplia aplicación de este modelo. Las principales ventajas de este método son la anastomosis se producen significativamente menos complicaciones tales como hemorragias y trombosis relacionada en comparación con el modelo de sutura 18.
Protocol
Representative Results
Discussion
El rechazo de aloinjertos vascularizados implica una gran cantidad de diferentes medidas que sólo pueden evaluarse suficientemente utilizando modelos in vitro. Fenómenos como la sensibilización de los receptores, el procesamiento de antígenos en los órganos linfoides secundarios, sino también la diferenciación y proliferación de células inmunocompetentes son mejor caracterizados in vivo. Los modelos animales son de esta manera la herramienta ideal para la investigación traslacional 16.</…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors declare that they have no competing financial interests.
Materials
| Yasargil Clip Mini Permanent 7mm | Aesculap | FE720K | |
| Micro vessel clip | S & T | B1 00396 V | |
| Microscissor | FST | 14075-11 | |
| Vesseldilatator | S & T | D-5a.2 00125 | |
| Microforceps | FST | Dumont 11271- 30 | |
| Clipapplicator | S & T | CAF-4 00072 | |
| Microvessel clip | S & T | B1 00396 V |
Riferimenti
- Brandacher, G., et al. Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity. Transplantation. 81, 583-589 (2006).
- Schneeberger, S., et al. The effect of secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) on ischemia/reperfusion injury in cardiac transplantation. Am J Transplant. 8, 773-782 (2008).
- Sucher, R., et al. IDO and regulatory T cell support are critical for cytotoxic T lymphocyte-associated Ag-4 Ig-mediated long-term solid organ allograft survival. JImmunol. 188, 37-46 (2012).
- Yamashita, K., et al. Heme oxygenase-1 is essential for and promotes tolerance to transplanted organs. FASEB J. 20, 776-778 (2006).
- Kienzl, K., et al. Proteomic profiling of acute cardiac allograft rejection. Transplantation. 88, 553-560 (2009).
- Aurora, P., et al. Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: tenth official pediatric lung and heart/lung transplantation report–2007. J Heart Lung Transplant. 26, 1223-1228 (2007).
- Häyry, P. Chronic allograft vasculopathy new strategies for drug development. Transplant Proc. 30, 3989-3990 (1998).
- Hosenpud, J. D. Immune mechanisms of cardiac allograft vasculopathy an update. Transpl Immunol. 1, 237-249 (1993).
- Libby, P., Pober, J. S. Chronic rejection. Immunity. 14, 387-397 (2001).
- Kouwenhoven, E. A., de Bruin, R. W., Heemann, U. W., Marquet, R. L., Ijzermans, J. N. Late graft dysfunction after prolonged cold ischemia of the donor kidney inhibition by cyclosporine. Transplantation. 68, 1004-1010 (1999).
- Kouwenhoven, E. A., Ijzermans, J. N., de Bruin, R. W. Etiology and pathophysiology of chronic transplant dysfunction. Transpl Int. 13, 385-401 (2000).
- Chen, Z. H. A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice. Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).
- Huang, X., Chen, D., Chen, L. [A modified model of cervical heterotopic cardiac transplantation for chronic rejection research]. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 22, 1508-1510 (2008).
- Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy. Nat Protoc. 2, 471-480 (2007).
- Wang, C. Y., et al. Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions. Circulation. 105, 1609-1614 (2002).
- Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique. Transplantation. 51, 896-898 (1991).
- Tomita, Y., et al. Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice. Transplantation. 64, 1598-1601 (1997).
- Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant. Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplant Proc. 11, 571-577 (1979).
- Maglione, M., et al. Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model. Am J Transplant. 10, 2231-2240 (2010).
- Heron, I. A technique for accessory cervical heart transplantation in rabbits and rats. Actapathologica et microbiologica Scandinavica Section A, Pathology. 79, 366-372 (1971).
