Explant संस्कृति में दांत कीटाणुओं के विकास के बाद के लिए टुकड़ा संस्कृति विधि
Summary
यहाँ विस्तार एक ऊतक हेलिकॉप्टर का उपयोग जबड़ा स्लाइस में संस्कृति दांत कीटाणुओं के लिए एक विधि हम. इस पद्धति अधिक पारंपरिक संस्कृति तरीकों का उपयोग कर उपलब्ध हेरफेर और वंश अनुरेखण, नहीं करने के लिए शानदार अवसर प्रदान करने, विकास के दौरान दांत के लिए अद्वितीय उपयोग की अनुमति देता.
Abstract
Explant संस्कृति विशिष्ट समय बिंदुओं पर अंगों के विकास और की जोड़ – तोड़ इसलिए विकास जीवविज्ञानी के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है की अनुमति देता है. कई अंगों के लिए यह पूर्व vivo संस्कृति दौरान निगरानी की अनुमति के लिए विकासशील ऊतक का उपयोग करने के लिए मुश्किल है. टुकड़ा संस्कृति विधि की अनुमति देता है ऊतक के लिए उपयोग इतना है कि morphogenetic आंदोलनों का पालन किया जा सकता है और विशेष सेल आबादी में गड़बड़ी या वंश पता लगाने के लिए लक्षित किया जा सकता है.
इस पत्र में हम प्रजातियों में से एक रेंज में दांत कीटाणुओं की संस्कृति के लिए बहुत सफल रहा है कि टुकड़ा संस्कृति की एक विधि का वर्णन. विधि अन्य जबड़े ऊतकों से घिरे vivo में मनाया है कि एक समान दर से विकसित जो दांत रोगाणु, के लिए उत्कृष्ट पहुँच प्रदान करता है. यह दांत और आसपास के ऊतक के बीच ऊतक बातचीत पर नजर रखी जा करने की अनुमति देता. इस पत्र दांत कीटाणुओं पर केंद्रित है, एक ही प्रोटोकॉल एक नंबर के विकास का पालन करने के लिए लागू किया जा सकता हैऐसे लार ग्रंथियों, मेकेल उपास्थि, नाक ग्रंथियों, जीभ, और कान के रूप में अन्य अंगों, के.
Introduction
प्रयोगों की एक संख्या के लिए यह संस्कृति ऊतक पूर्व vivo विकास का पालन करने के लिए सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है. ऊतक विकसित करने की संस्कृति विकास की परिभाषित समय पर पहुँच प्रदान करता है और संस्कृति के माध्यम से कारकों के अलावा द्वारा जीन की हेरफेर, या भरी हुई मनकों पर, और अभिकर्मक और electroporation 1 के उपयोग के द्वारा की अनुमति देता है. कई प्रयोगों के लिए यह रूप में यह बढ़ती ऊतक morphogenesis से होकर गुजरती रूप वंश लेबल की कोशिकाओं के भाग्य का पालन करने के लिए, उदाहरण के लिए, ऊतक कल्पना करने में सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है. इस भ्रूण से ऊतक का एक ब्लॉक सुसंस्कृत है जब स्पष्ट नहीं कर रहे हैं, जो गहरे भ्रूण के भीतर विकसित ऊतकों कि, के लिए विशेष रूप से समस्याग्रस्त हो सकता है. वे जबड़ा, जबडा और ललाट नाक प्रक्रिया के भीतर विकसित रूप में दांत, इस के अच्छे उदाहरण हैं. पूरे जबड़ा सुसंस्कृत है जब तय ऊतक के सेक्शनिंग के बाद दांत की सतही संरचनाओं देखा जा सकता है लेकिन आकारिकी में परिवर्तन ही विश्लेषण किया जा सकता है <sऊपर> 2. हम हमारे दांत रोगाणु विकास का पालन करने की अनुमति देता है और विकास के दौरान दांत के विभिन्न भागों तक पहुँच प्रदान करने के लिए एक जीवित टुकड़ा संस्कृति तकनीक ढाल लिया है. एक संशोधित Trowell विधि 3 का उपयोग गैस तरल इंटरफेस में तकनीक संस्कृतियों दांत रोगाणु स्लाइस,. ये टुकड़ा संस्कृतियों सीधे दांत के morphogenesis निम्नलिखित, और इस तरह के तामचीनी गाँठ और दंताकुर और कूप 1,4-7 के रूप में अलग घटकों के वंश अनुरेखण अनुमति देने में बहुत उपयोगी किया गया है. तकनीक माउस भ्रूण तक सीमित नहीं है और सफलतापूर्वक सुअर की संस्कृति लाइव स्लाइस और साँप दंत ऊतक 8,9 करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. दांत विकास कल्पना करने के लिए सक्षम होने के लाभ के अलावा, टुकड़ा विधि भी ऊतक की पतली स्लाइस इनक्यूबेटर से मध्यम और हवा से पोषक तत्वों के लिए उपयोग में वृद्धि हुई है कि लाभ है. इस विवो में विकास से मेल जो दांत रोगाणु, और शो invas के बेहतर विकास में परिणामpapilla 7 में endothelial कोशिकाओं के आयन. इसके विपरीत, पूरे जबड़ा संस्कृतियों में दांत कीटाणुओं विवो में उन लोगों की तुलना में धीमी विकसित और संस्कृति के केंद्र में लंबी अवधि संस्कृतियों में परिगलित अक्सर है. टुकड़ा संस्कृति में, दांत जबड़े का एक टुकड़ा के भीतर विकसित करता है, और आसपास के विकास हड्डी और अन्य ऊतकों के साथ अपनी बातचीत पर नजर रखी जा सकती है. हमारे विधि में ऊतक सीधे एक समर्थन मध्यम 10,11 में एम्बेड करने के लिए कोई ज़रूरत नहीं है और काट खंड के लिए ऊतक संलग्न करने के लिए किसी भी प्रणाली के लिए कोई जरूरत के साथ विच्छेदन के बाद कटा हुआ है. विधि कई mandibles एक सत्र में sectioned करने की अनुमति, इसलिए noninvasive और तेजी से है.
Protocol
Representative Results
Discussion
दांत संस्कृति का यह तरीका दांत रोगाणु के लिए पहुंचने वाले लाभ सही वंश उपकला या mesenchyme भीतर अनुरेखण और मोतियों की नियुक्ति की अनुमति, उत्कृष्ट है है. विकासशील दांत रोगाणु के निर्धारित क्षेत्रों इसलिए विश?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
सारा ए Alfaqeeh दंत चिकित्सा, उच्च शिक्षा मंत्रालय, सऊदी अरब के राज्य की तरह सऊद यूनिवर्सिटी कॉलेज द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethanol | VWR | 101077Y | 100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%. |
| DMEM F12 | Gibco | 12634-010 | Advanced Dulbecco's Modified Eagle Medium F12 |
| GlutaMAX | Gibco | 35050-061 | |
| Invitrogen | |||
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P0781 | |
| DiI (Molecular probes) | Vybrant | V-22885 | Cell-labeling solution |
| Invitrogen | Cell tracker CM-DiI, C-7000 | ||
| DiO (Molecular probes) | Vybrant | V22886 | |
| Invitrogen | |||
| Geminator 500 | Thomas | Thomas No. 3885A20 | Dry-heat sterilization |
| McIlwain tissue chopper | Ted Pella, Inc. | 10180 | Standard table |
| Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish) | Falcon | 353037 | |
| Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 μm pore size) | BD Falcon | 353090 | PET track-etched membrane, 6-well format |
| Metal grids (Stainless Steel – AISI 304 – Mesh) | Goodfellow | FE228710 | (Fe/Cr18/Ni10) |
| AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator | Nuaire | NU-5500 | |
| Picospritzer III | Intracel Ltd | 051-0500-900 0-100 psi | Single channel picospritzer III |
| Glass capillary with filament 1 mm | WPI | TW100F-4 | |
| Tungsten wire 0.1 mm | Goodfellow | W005138 | |
| Tungsten wire 0.38 mm | Goodfellow | W005155 | |
| Aspirator tubes | Sigma | A5177 | Used for mouth aspiration lineage tracers |
Riferimenti
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