Åtseletere har potensial til å translocate smittsomme overførbare spongiforme encefalopati prioner i deres avføring til sykdomsfrie områder. Vi detalj metoder som brukes for å avgjøre om mus-tilpasset skrapesyke prioner forbli smittsomme etter passering om fordøyelseskanalen av amerikanske kråker (Corvus brachyrhynchos), en vanlig forbruker av døde dyr.
Infeksiøs prion (PrP Res) materialet er sannsynligvis årsaken til dødelig, nevrodegenerativ overførbar spongiform encefalopati (TSE) sykdommer en. Overføring av TSE-sykdommer, slik som kronisk wasting sykdom (CWD), er antatt å være fra dyr til dyr 2,3, så vel som fra miljøkilder 4-6. Åtseletere og rovdyr har potensial til å translocate PrP Res materiale gjennom forbruk og utskillelse av CWD-forurenset åtsler. Nyere arbeider har dokumentert passering av PrP Res materiale gjennom fordøyelsessystemet av amerikanske kråker (Corvus brachyrhynchos), en felles nordamerikanske gatefeier 7.
Vi beskriver prosedyrer som brukes til å dokumentere passering av PrP Res materiale gjennom amerikanske kråker. Crows ble gavaged med RML-belastning mus-tilpasset skrapesyke og deres avføring ble samlet 4 hr innlegg sonde. Kråke avføring ble deretter samlet og injisert intraperitonealt innC57BL / 6 mus. Musene ble overvåket daglig inntil de uttrykte kliniske tegn på muse skrapesyke og ble deretter avlives. Asymptomatiske mus ble fulgt til 365 dager etter vaksinasjonen. Western blot-analyse ble utført for å bekrefte sykdomsstatus. Resultatene viste at prioner forbli smittefarlig etter reiser gjennom fordøyelsessystemet til kråker og er til stede i avføringen, forårsaker sykdom hos test mus.
Overførbare spongiforme encefalopatier (TSE) er dødelige smittsomme nevrodegenerative lidelser som påvirker dyreliv, husdyr og mennesker. Smittestoffet av TSE sykdommer ser ut til å være misfolded eller patogene isoformer (PrP Res) av prionproteiner en. Animal TSE sykdommer inkluderer chronic wasting disease (CWD) i hjort (Odocoileus hemionus), white-tailed deer (Odocoileus virginianus), elg (Cervus elaphus), og elg (Alces alces), skrapesyke hos sau og geit, bovin spongiform encefalopati ( BSE) i husdyr; overfør mink encefalopati hos oppdretts mink; feline spongiform encefalopati hos katter; eksotisk hovdyr spongiform encefalopati i eksotiske dyrehagen ruminates av familien Bovidae, og spongiform encefalopati hos ikke-menneskelige primater åtte. Den eneste menneske TSE sykdom, variant Creutzfeldt-Jakobs sykdom, er sjeldne og tenkte å bli kjøpt opp av forbruker PrP Res-contaminrerte mat ni. På samme måte kan BSE smitte mennesker hvis forurenset biff er fortært 10. Av alle TSE sykdommer, skrapesyke og CWD er de to eneste med selvbærende epidemier og kilder for smitte antas å være fra dyr til dyr 2,3,11 samt fra miljø kilder 4-6. Forskning tyder på at de fleste TSE sykdommer krever bemerkelsesverdige lengre inkubasjonsperioder fra naturlige eksponerings hendelser av PrP Res materialet til manifestasjon av kliniske tegn 2-4,6,8 og åpenbare arter barrierer minimere, men ikke eliminere muligheten for, uspesifikt overføring 12-14 .
Identifisere mekanismer for spredning av smittsomme prion (PrP Res) materialet er ekstremt viktig for å svare på spørsmål om hvordan TSE sykdommer beveger seg over landskapet. Eksperimentelle undersøkelser har antydet at insekter 15,16, fjørfe og svin 17, og amerikanske kråker (Corvus Brachyrhynchos) 7,18 er passive bærere eller dispersers av PrP Res materiale. Passering av PrP Res materiale gjennom fordøyelsessystemet til kråker har nylig blitt dokumentert, viser hvilken rolle de kan spille i spredning av TSE sykdommer 7. Disse resultatene gjør det plausibelt at kråker, en gatefeier, kan støte på, forbruke, og transportere infeksiøst materiale via avføring deponering, til sykdomsfrie områder.
Prosedyrene vi viser her ble brukt til å dokumentere passering av PrP Res materiale gjennom fordøyelsessystemet hos kråker, og vil i stor grad lette anvendelsen av disse metodene til andre åtseldyr og rovdyr-spesifikke modeller i relatert fremtidig forskning. I denne studien konvensjonelle metoder ble brukt for å undersøke en ukonvensjonelle midler for menneskehandel PrP Res materiale, som kan bidra til spredning og totale byrden av PrP Res materiale.
Vi viser en prosedyre for å dokumentere passering av PrP Res materiale gjennom fordøyelsessystemet til kråkene. Vi har benyttet konvensjonelle fremgangsmåter for å bestemme om galer har evnen til å translocate PrP Res materialet til sykdomsfrie geografiske områder. Andre har evaluert motstand av PrP Res til drøvtyggere 19-21 og gnager 22,23 fordøyelsesvæsker, som begge klarte å eliminere den. Fremtidig bruk av disse teknikkene skal brukes til andre rovdyr…
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gjerne takke S. Werner for å gi kråkene brukt i denne studien og USDA, APHIS, WS, NWRC dyr omsorg ansatte for dyr omsorg og oppfølging. Nevn eller bruk av et produkt innebærer ikke USDA påtegning. Finansiering for denne studien ble gitt av USDA, APHIS, Veterinary Services.
RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
American crows | wild captured | ||
Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
Sonicator | Misonix | ||
Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
G-box gel documentation system | Syngene |