長期的な慢性<em>緑膿菌</emマウスにおける>気道感染
Summary
我々は、マウスモデルにおいて、長期持続性の慢性緑膿菌気道感染を確立する寒天ビーズ法を記載している。
Abstract
モデル自体に関する懸念の数があるが、慢性気道感染症のマウスモデルは、嚢胞性線維症（CF）の研究における重要な資産である。少数の報告は、インビボで長期の慢性感染症に焦点を当ててきたが、炎症および感染の初期相は広く、 緑膿菌寒天ビーズマウスモデルを用いて研究されている。長期的な慢性感染症のための主な課題は、P.により低細菌量のまま細菌細胞が徐々にホストによってクリアされていることを示すチャレンジ後の緑膿菌感染したマウスの週の割合が低い。
本論文では、マウスでは、効率的な長期慢性感染を得るための方法を提示します。この方法は、Pの埋め込 みに基づいていますC57Bl/6NCrlマウスの気管内注入に続いて、in vitroで寒天ビーズ中緑膿菌臨床株、。両肺感染はSEVと関連している体重減少、死亡率、慢性感染症、および炎症性応答を含むERAL測定可能なリードアウト。 P.それは、比較的低い死亡率、より深刻な病変、および高い慢性感染をもたらしたため、 緑膿菌 RP73臨床株はPAO1の参照実験室株よりも好まれた。P.緑膿菌のコロニー形成は、3ヶ月以上の肺に固執することができる。マウス肺の病理は、高度な慢性肺疾患を持つCF患者のそれに似ている。
このマウスモデルに最も近いヒトの疾患の過程を模倣および病原性の研究および新規な治療法の評価のための両方に使用することができる。
Introduction
嚢胞性線維症（CF）は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（CFTR）遺伝子の突然変異によって引き起こされる遺伝病である。この遺伝子は、ほとんどの上皮細胞の膜上に発現するクロライドチャネルをコードする。気管支拡張症、粘液詰まりおよび実質破壊は徐々にCF患者1のほとんどの深刻な肺疾患と死亡につながる緑膿菌感染が主な原因。 CFの病因と新しい治療法のさらなる発展を理解することは、CFの特徴を持つ動物モデルに依存しています。遺伝子操作のためのCFTR遺伝子改変いくつかのマウスは、生成されたが、CF-のような肺疾患およびCF患者に見られるいくつかの他の臓器の異常を再現するためにこれらの種の能力には限界が広く2実証されている。
感染症の発症は、CF動物モデルにおける主要な課題の一つである。文献CL初期のマウスは、寒天、アガロース、アルギン酸または海藻までの時間として固定化剤中に埋め込 まれた細菌を接種している場合にのみ、一ヶ月以上持続する慢性感染を達成することができることを示唆している。これらの固定化剤は、細菌が、同様にCF患者6の粘液の成長のために、微小コロニーの形で成長させる微好気/嫌気条件を提供しています。慢性感染症のこのモデルは、気道炎症および損傷7を引き起こす肺における細菌の持続性をもたらす。しかしながら、使用される方法細菌株および肺に接種用量に応じて、異なる時点で、肺で回収慢性感染マウスのパーセンテージおよび細菌負荷はかなり異なることができる。具体的には、長期的な慢性感染症のための主な課題は、P.により低細菌量のままチャレンジ後の緑膿菌感染したマウスの週の低い割合、THAを示すT菌体を徐々にホストによってクリアされます。 P.を選択することによりCFのコレクションから、 緑膿菌の RP73臨床株は8我々は成功し、低死亡率を得、より重度の病変を分離し、C57Bl/6NCrlマウスにおける1ヶ月まで安定細菌負荷による慢性感染の割合が高い。
本論文では、Pを埋め込 むための方法論を詳述寒天ビーズ中緑膿菌 、我々は、気管内注入によりマウスを感染させた肺中の細菌負荷およびサイトカインを測定し、BAL液を採取し、組織学的検査を行った。全体的に、このプロトコルは、病因の8,9に根本的に重要な問題に対処するとP.に対する新規治療法をテストする際に研究者を支援します緑膿菌慢性感染10,11。
Protocol
Representative Results
Discussion
P.における重要なステップ緑膿菌ビーズの準備とマウスの課題を以下に報告されています。
マウスの挑戦のために使用される緑膿菌株は非常に重要です。死亡率、慢性感染症やクリアランスは挑戦のために使用された細菌株によって大きく異なる可能性があります。 P.それは、比較的低い死亡率、より深刻な病変、および高い慢性感染をもた?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bragonziの研究室での研究は、イタリアの嚢胞性線維症財団（CFaCore）とEU-F7-2009から223670によって資金を供給されています。この研究の一部は、アレンビック、高度な顕微鏡実験室で行った、マウス組織病理は病理解剖学（サンラファエルバッグ研究所）の単位で行った。
Materials
| Bacto Tryptic Soy Broth | Becton Dickinson | 211823 | |
| Difco Agar, granulated | Becton Dickinson | 214510 | |
| Heavy mineral oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | |
| S-(+)-Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich | K1884 | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich | X1251 | |
| 1 ml syringe 25 G 5/8'' 0.5 x 16 mm | PIC | 3071250300350 | |
| Catheter 22GA 0.9 x 25 mm | Becton Dickinson | 381223 | |
| Graefe Forceps – 0.5 mm Tips Curved | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Scissors, Iris, 11 cm, straight | World Precision Instruments | 501758 | |
| Suture clips | Fine Science Tools | 12040-01 | |
| Suture thread | Fine Science Tools | 18020-40 | |
| RPMI 1640 | Lonza | BE12-167F | |
| Complete protease inhibitor cocktail | Roche | 11836145001 | |
| Fast-Read 102 Burker disposable chamber | Biosigma | 390497 | |
| Tuerk solution | Fluka | 93770 | |
| RBC lysis buffer | Biolegend | 420301 | |
| Fetal bovine serum | Lonza | DE14-801F | |
| EZ cytofunnel | Thermo Scientific | A78710021 | |
| Superfrost ultra plus microscope slides | Thermo Scientific | J3800AMNZ | |
| Diff-Quik Romanowsky staining set | Medion Diagnostics | 130832 | |
| Hexadecyltrimethylammonium chloride | Sigma-Aldrich | 52366-10G | |
| 96-well EIA/RIA plate | Costar | 3590 | |
| 3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine | Sigma-Aldrich | T8665-1L | |
| Sulfuric acid | Sigma-Aldrich | 320501-1L | |
| 10% neutral buffered formalin | Bio-optica | 05-01005Q | |
| Harris haematoxylin non Papanicolau | Bio-optica | 05-M06004 | |
| Eosin plus alcoholic solution | Bio-optica | 05-M11007 | |
| [header] | |||
| Equipment | |||
| Shaking incubator | Amerex Instruments | Steady Shake 757 | |
| Water bath | Grant | SUB14 | |
| Homogenizer | Ystral | ||
| Precision balance | KERN | 440-47N | |
| Cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | |
| Low Cost Heating Pad | 2biol | LCHP | |
| Homogenization probe | Ystral | 2366931(great) | |
| 2366925(small) | |||
| Inverted optical microscope | Zeiss | Axioplan2 | |
| Camera (microscope) | Zeiss | Axiocam MRc5 | |
| Rotary microtome | Leica | RM2255 |
Riferimenti
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