장기 만성<em> 녹농균</em마우스의>기도 감염
Summary
우리는 마우스 모델에서 지속적인 장기 만성 녹농균기도 감염을 확립하는 한천 비즈 방법을 서술.
Abstract
모델 자체에 관한 관심의 개수가 있지만 만성기도 감염의 마우스 모델은 낭포 성 섬유증 (CF)의 연구에서 중요한 자산이다. 단지 소수의보고가 생체 내에서 장기간의 만성 감염에 집중 반면 염증과 감염의 초기 단계는 광범위하게, 녹농균 한천 비즈 마우스 모델을 이용하여 연구 하였다. 장기 만성 감염의 주요 과제는 P.에 의해 낮은 세균 부담이 남아있다 녹농균이라는 박테리아 세포가 점진적으로 호스트에 의해 취소 된 것을 나타내는 공격 후 감염된 쥐 주의 낮은 비율.
이 논문은 생쥐에서 효율적으로 장기 만성 감염을 얻기위한 방법을 제시한다. 이 방법은 P.의 매립에 기초 C57Bl/6NCrl 마우스에서 기관 내 점적 한 다음 체외 한천 구슬 녹농균 임상 균주. 양측 폐 감염 SEV와 관련된체중 감소, 사망률, 만성 감염 및 염증 반응 등의 ERAL 측정 판독을. P. 그것은 비교적 낮은 사망률, 더 심한 병변, 높은 만성 감염의 결과 때문에 녹농균 RP73 임상 균주 PAO1 참조 실험실 변형 선호했다. P. 녹농균의 식민지 세 개월 이상 폐에 지속될 수 있습니다. 쥐의 폐 병리 고급 만성 폐 질환을 가진 CF 환자의 그것과 유사합니다.
이 뮤린 모델은 가장 밀접 인간 질병의 과정을 모방 및 병인에 대한 연구 및 신규 한 치료의 평가를 모두 사용할 수있다.
Introduction
낭포 성 섬유증 (CF)는 낭성 섬유증의 transmembrane의 전도성 조정기 (CFTR) 유전자의 돌연변이에 의해 발생하는 유전 질환이다. 이 유전자는 대부분의 상피 세포의 세포막에 발현 클로라이드 채널 인코딩한다. 기관지 확장증, 점액 플러그 및 실질 파괴는 점진적으로 심각한 폐병과 CF 환자 1의 대부분의 사망으로 이어질 녹농균 감염에 의해 주로 일으키는 원인이되었다. 이해 CF의 발병 기전과 새로운 치료법의 발전은 CF의 특징적인 기능을 동물 모델에 의존하고 있습니다. 유전자 CFTR 유전자에 대해 수정 몇몇 마우스는 생성되었지만, CF와 같은 폐 질환과 CF의 환자에서 본 여러 가지 다른 장기의 이상을 요점을 되풀이하는이 종의 능력에 한계가 널리 2 문서화되었습니다.
감염의 개발은 CF의 동물 모델에서 가장 중요한 문제 중 하나입니다. 문학 CL이른 쥐가 이러한 한천, 아가로 오스, 또는 해조류 알긴산 3-5로 고정 화제에 매립 균을 접종 한 경우에만 한 달 이상 지속되는 만성 감염이 달성 될 수 있다는 것을 시사한다. These 고정화 제제 박테리아 마찬가지로 CF 환자 6의 점액 성장에, microcolonies 형태 성장에 허용 호기성 / 혐기성 상태 제공. 만성 감염이 모델은기도 염증 손상 7을 일으키는 원인이되는 폐의 박테리아의 지속성에 이르게한다. 그러나, 사용 된 방법, 균주 및 폐 식균 복용량에 따라 서로 다른 시점에서 폐에서 회수 만성 감염된 마우스의 백분율 및 세균 부하는 상당히 다를 수있다. 특히, 장기 만성 감염의 주요 과제는 P.에 의해 낮은 세균 부담이 남아있다 녹농균 및 공격 후 감염된 쥐 주 동안의 낮은 비율을 나타내는 그쪽으로T 박테리아 세포는 점차적으로 호스트에 의해 삭제됩니다. P.를 선택함에 CF의 수집에서 녹농균 RP73 임상 균주는 우리가 성공적으로 C57Bl/6NCrl 쥐 한 달 안정적인 세균 부하쪽으로 낮은 사망률, 더 심한 병변, 만성 감염의 높은 비율을 얻은 8 분리합니다.
본 논문에서는 P.를 포함에 대한 방법을 자세히 설명 한천 구슬 녹농균, 우리는, 기관 내 점적으로 쥐를 감염 폐에 세균 하중과 사이토 카인을 측정, BAL 유체를 수집하고 조직 학적 검사를 수행했습니다. 전반적으로,이 프로토콜은 병인의 8,9에 근본적으로 중요한 문제를 해결하고 P.에 대한 새로운 치료법을 테스트하는 연구자 도움이됩니다 녹농균 만성 감염 10, 11.
Protocol
Representative Results
Discussion
P.에있는 중요한 단계 녹농균 비즈 준비 및 마우스 문제는 아래에보고됩니다.
마우스 도전에 사용되는 녹농균 변형이 중요합니다. 사망, 만성 감염 또는 통관 도전에 사용되는 균주에 따라 크게 다를 수 있습니다. P. 그것은 비교적 낮은 사망률, 더 심한 병변, 높은 만성 감염의 결과 때문에 녹농균 RP73 임상 균주 PAO1 참조 실험실 변형 선호했?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bragonzi의 실험실에서 연구는 이탈리아 낭포 성 섬유증 재단 (CFaCore) 및 EU-F7-2009-223670에 의해 투자되었다. 이 작품의 일부는 증류기, 고급 현미경 실험실에서 실시하고, 마우스의 조직 병리학은 병리학 해부학 (산 라파엘 과학 연구소) 단위로 수행되었다.
Materials
| Bacto Tryptic Soy Broth | Becton Dickinson | 211823 | |
| Difco Agar, granulated | Becton Dickinson | 214510 | |
| Heavy mineral oil | Sigma-Aldrich | 330760-1L | |
| S-(+)-Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich | K1884 | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich | X1251 | |
| 1 ml syringe 25 G 5/8'' 0.5 x 16 mm | PIC | 3071250300350 | |
| Catheter 22GA 0.9 x 25 mm | Becton Dickinson | 381223 | |
| Graefe Forceps – 0.5 mm Tips Curved | Fine Science Tools | 11152-10 | |
| Scissors, Iris, 11 cm, straight | World Precision Instruments | 501758 | |
| Suture clips | Fine Science Tools | 12040-01 | |
| Suture thread | Fine Science Tools | 18020-40 | |
| RPMI 1640 | Lonza | BE12-167F | |
| Complete protease inhibitor cocktail | Roche | 11836145001 | |
| Fast-Read 102 Burker disposable chamber | Biosigma | 390497 | |
| Tuerk solution | Fluka | 93770 | |
| RBC lysis buffer | Biolegend | 420301 | |
| Fetal bovine serum | Lonza | DE14-801F | |
| EZ cytofunnel | Thermo Scientific | A78710021 | |
| Superfrost ultra plus microscope slides | Thermo Scientific | J3800AMNZ | |
| Diff-Quik Romanowsky staining set | Medion Diagnostics | 130832 | |
| Hexadecyltrimethylammonium chloride | Sigma-Aldrich | 52366-10G | |
| 96-well EIA/RIA plate | Costar | 3590 | |
| 3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine | Sigma-Aldrich | T8665-1L | |
| Sulfuric acid | Sigma-Aldrich | 320501-1L | |
| 10% neutral buffered formalin | Bio-optica | 05-01005Q | |
| Harris haematoxylin non Papanicolau | Bio-optica | 05-M06004 | |
| Eosin plus alcoholic solution | Bio-optica | 05-M11007 | |
| [header] | |||
| Equipment | |||
| Shaking incubator | Amerex Instruments | Steady Shake 757 | |
| Water bath | Grant | SUB14 | |
| Homogenizer | Ystral | ||
| Precision balance | KERN | 440-47N | |
| Cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | |
| Low Cost Heating Pad | 2biol | LCHP | |
| Homogenization probe | Ystral | 2366931(great) | |
| 2366925(small) | |||
| Inverted optical microscope | Zeiss | Axioplan2 | |
| Camera (microscope) | Zeiss | Axiocam MRc5 | |
| Rotary microtome | Leica | RM2255 |
Riferimenti
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