Vaccinazione profilattica e terapeutica spesso non riesce a stimolare forti risposte immunitarie dovuto settimana drenaggio del vaccino ai linfonodi e conseguente scarsa coinvolgimento delle cellule immunitarie. Mediante iniezione diretta di vaccino da linfonodi, cosiddetta iniezione endolinfatica, l'efficacia del vaccino può essere fortemente migliorata e dosi di vaccino può essere ridotta.
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Articolo metodologico
Endolinfatica immunoterapia e di vaccinazione nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
I vaccini sono tipicamente iniettati per via sottocutanea o intramuscolare per la stimolazione delle risposte immunitarie. Il successo di questo richiede drenaggio efficiente di vaccino ai linfonodi dove le cellule presentanti l'antigene possono interagire con i linfociti per la generazione delle risposte immunitarie voluto. La forza e il tipo di risposte immunitarie indotte dipendono anche dalla densità o frequenza di interazioni nonché il microambiente, in particolare il contenuto di citochine. Poiché solo una minima parte di vaccini iniettati perifericamente raggiunge linfonodi, le vaccinazioni di topi e gli esseri umani sono stati eseguiti mediante iniezione diretta di vaccino nei linfonodi inguinali, cioè l'iniezione endolinfatica. Nell'uomo, la procedura è guidata da ultrasuoni. Nei topi, una piccola (5-10 mm) incisione viene fatta nella regione inguinale di animali anestetizzati, il linfonodo è localizzato e immobilizzato con una pinza, e un volume di 10-20 ml di vaccino viene iniettato sotto controllo visivo.L'incisione viene chiusa con un solo punto usando suture chirurgiche. I topi sono stati vaccinati con il plasmide DNA, RNA, peptidi, proteine, particelle e batteri e coadiuvanti, e si è osservata una forte miglioramento delle risposte immunitarie contro tutti i tipi di vaccini. Il metodo endolinfatica della vaccinazione è particolarmente indicata nelle situazioni in cui la vaccinazione convenzionale produce immunità insufficiente o in cui la quantità di vaccino disponibile è limitato.
Introduzione
I vaccini sono tipicamente iniettati per via sottocutanea o intramuscolare stimolazione delle risposte immunitarie. Il successo di questa procedura richiede drenaggio efficace di vaccino ai linfonodi dove le cellule presentanti l'antigene possono interagire con i linfociti per la generazione di risposte T e B-cellule. Inoltre, la forza e il tipo di risposte immunitarie indotte dipendono anche dalla densità o frequenza di tali interazioni, nonché il microambiente stesso, specialmente il contenuto di citochine. Poiché solo una piccola frazione di un vaccino iniettato in un tessuto periferico raggiunge un linfonodo, vaccinazioni di topi e nell'uomo mediante inie....
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Protocollo
1. Anestesia di topi
- Preparare i anestetici mescolando ketamina (anestetico dissociativo) e xilazina (sedativo e analgesico) in soluzione salina tamponata. Le concentrazioni di chetamina e xilazina nella soluzione finale sono 12,5 e 2 mg / ml, rispettivamente.
- Iniettare anestetici ai topi per somministrazione intraperitoneale utilizzando una siringa con un ago G 25-30. Utilizzare 0,1 ml/10 g di peso corporeo.
- Applicare una pomata oftalmica per gli occhi dei topi in modo da evitare l'essiccazione-out delle cornee.
- Assicurarsi che il mouse sia sufficientemente anestetizzato pizzicando il piede o del piede con le pinze. Se il....
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Risultati
La procedura di iniezioni intralinfatiche nei topi, nonostante la natura chirurgica, è semplice e relativamente veloce. Una persona esperta in grado di eseguire la procedura in 3-4 min. L'incisione che è chiuso con un punto guarisce in genere entro due giorni (Figura 1)
Endolinfatica vaccinazione o immunizzazione è stato eseguito con mRNA, DNA plasmidico, peptidi, proteine, virus e batteri. Figura 2 illustra la produzione anticorpale dopo immunizzazione .......
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Discussione
Immunizzazione endolinfatica e immunoterapia hanno dimostrato di essere adatto per la stimolazione di entrambe le risposte anticorpali e risposte delle cellule T. Come dimostrato in questo video-articolo, la procedura endolinfatica di vaccinazione è un metodo semplice e veloce per stimolare una forte risposta immunitaria nei topi. Un chirurgo esperto può eseguire la procedura durante 3-4 min. La sessione può anche essere condiviso tra due chirurghi in cui si è tipicamente facendo l'anestesia e la sutura e il secondo.......
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Dichiarazioni
TMK è chiamato come inventore di brevetti che si occupano di immunoterapia endolinfatica nell'uomo. TMK è stato consulente scientifico ed ha ricevuto le spese di viaggio da ImVisioN GmbH, Cytos Biotechnology, MannKind Corporation, e XBiotech USA Inc. PJ non ha alcun interesse conflitto di rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori sono grati per l'aiuto sperimentale nello sviluppo del metodo di immunizzazione endolinfatica nei topi da Iris Erdmann, Barbara von Beust, e Julia Maria Martínez-Gómez. Grazie anche a Maggy Arras e Nikola Cesarovic per averci permesso di usare la loro sala operatoria per questa produzione video.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Ketamina (Ketasol-100) | Graeub AG, Svizzera | Anestetici | |
| Xilazina (Rompun) | Bayer, Germania | Anestetici | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Svizzera | Per evitare che gli occhi si secchino durante l'anestesia. | |
| BD Micro-Fine 0,5 ml | BD Medical, Francia | 29 G Siringhe da insulina con aghi fissati in modo permanente | |
| 6-0 Dermalon Monofilamento Nylon | Covidien, MA, USA | Per suture (0,7 metriche, 18 G, 45 cm, Blu) | |
| Pinze curve, 4,5 in | Polymed, Svizzera | Per l'incisione e la tenuta dei linfonodi | |
| Forbici chirurgiche diritte, 4,5 in | Polymed, Svizzera | Per incisione | |
| Porta ago, 5,5 in | Polymed, Svizzera | Per chiudere l'incisione con la sutura |
Riferimenti
- Johansen, P., et al. Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity. Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).
- Maloy, K. J., et al. Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ....
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Ristampe e permessi
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