按时间当然吲哚菁绿血管造影检测脉络膜血管系统异常在年龄相关性黄斑变性的小鼠模型

Summary

通过尾静脉注射进行吲哚青绿血管造影（ICGA或）提供高品质的ICGA时间过程的图像在小鼠脉络表征异常。

Abstract

吲哚菁绿血管造影术（或ICGA）是由眼科医生进行诊断脉络膜和各种眼病，如年龄相关性黄斑变性（AMD）的视网膜血管系统的异常的技术。 ICGA就是将图像特别有用的眼睛由于通过着色层，其红外光谱穿透它的能力后的脉络膜血管。 ICGA时间过程可分为早期，中期和晚期阶段。这三个阶段提供的眼部问题的病理有价值的信息。虽然时间过程ICGA通过静脉（IV）注射剂被广泛应用于临床为脉络膜问题的诊断和管理，ICGA腹腔注射（IP）是常用于动物研究。在这里，我们展示了技术，通过尾静脉注射和共焦激光扫描检眼镜在小鼠体内获取高分辨率ICGA时间过程的图像。我们使用这种技术对图像中的脉络膜乐本期开始的年龄相关性黄斑变性的小鼠模型。虽然这是很容易引入ICG鼠标脉管系统通过IP，我们的数据表明，这是难以通过IP ICGA获得可重复性ICGA时间过程的图像。与此相反，通过尾静脉注射ICGA提供高品质的ICGA时间过程的图像媲美人类的研究。此外，我们发现，ICGA对小白鼠进行使脉络膜血管比对色素的小鼠进行更清晰的图像。我们认为，时间进程IV-ICGA应该成为基于动物模型研究的AMD的标准做法。

Introduction

吲哚菁绿血管造影（ICGA）是一种诊断测试的眼睛相关的血管图像的问题。 ICG的吸收光谱从790-805纳米范围内，而发射光谱范围为770-880纳米，在835纳米¹的峰值发射。这是从其他流行染料，荧光素钠，其光谱落在在可见光范围内的不同。红外光谱使ICG穿透视网​​膜色素上皮细胞（RPE），serosanguineous流体，及脂质渗出物，所有这些都通过钠 – 荧光素为基础的荧光素血管造影术（FA）可以很容易地阻挡可视化。 ICG是98％的蛋白质结合的从而减少渗出血管，使脉络膜血管与脉络膜病变^1,2增强成像。 ICGA几乎是唯一的选择，以可视化的脉络膜血管，这是后到的RPE。 图1显示ICGA和FA在小鼠眼成像血管的比较。 FA可以bË用于图像的视网膜血管很好，但不是脉络膜血管。与此相反，ICGA可用于图像既视网膜和脉络膜血管系统。 ICGA与高分辨率数字成像系统或扫描激光检眼镜（SLO），连同红外感光摄像头，这是我们在本研究将使用执行。

在临床上，ICGA已在诊断多项的脉络膜视网膜疾病的累及脉络膜血管系统，包括息肉状脉络膜血管病变（PCV），视网膜血管瘤样增生（RAP），视网膜血管样纹，卵黄黄斑营养不良，中心性浆液性脉络膜视网膜病变，脉络膜血管瘤，出血性视网膜推荐动脉macroaneurysms，脉络膜肿瘤，及后的某些形式葡萄膜炎^1,3。 ICGA与FA和光学相干断层扫描（OCT）的结合提供了强大的工具，在渗出性年龄相关性黄斑的诊断和管理的临床医生变性^{（AMD）4-10。} ICGA用于诊断涉及脉络膜情况特别有用。事实上，ICGA被认为是黄金标准诊断PCV，渗出型AMD ^11-13的一个变种。 PCV的特点是分支血管与终端息肉状扩张术在脉络膜血管^11-13网络。 PCV经常与视网膜色素上皮和视网膜有泄漏，并从息肉状组件^11,14,15出血复发serosanguineous支队有关。我们最近通过转基因表达人HTRA1，多官能丝氨酸蛋白酶，在小鼠的视网膜色素上皮细胞^（RPE）16报告第一PCV动物模型的生成。我们发现，增加HTRA1引起的肺炎球菌结合疫苗特征， 如息肉状病变。

在这里，我们展示了通过尾静脉注射使用我们的HTRA1小鼠模型研究的AMD使用时间过程ICGA的。我们的数据表明，IV-ICGA优于IP（或皮下（SC）），当前使用中的字段^17,18为在脉络膜病变表征-ICGA。

在动物研究表

动物实验时，按照批准的机构动物护理和使用委员会（IACUC）协议进行，并按照ARVO声明在眼科和视觉研究用动物被执行。

Protocol

1。仪器的研制在过程室中的动物设施中进行的过程。 在开始实验前戴口罩，帽子的头发，手术衣，无菌脚罩和手套。 耐热水的烧杯〜40℃的热板上。 放置无菌蓝色垫加热垫，将在以后用于保持成像时的小鼠的体温的顶部。打开加热垫。 准备成像系统： 取下防尘罩，并打开激光。 取出55°镜头，并将其安装到机器上。 从电脑输入的鼠标成像?…

Representative Results

我们进行ICGA时间过程中HTRA1转基因小鼠和野生型对照窝，这两者都在CD1背景。白化CD1背景被选中，以方便吲哚青绿血管造影（ICGA）成像（见讨论）。有些动脉瘤样扩张术开始出现在HTRA1小鼠的早期阶段（ 图2，红色箭头表示扩张在容器的顶端和一个红色的圆圈表示一个簇型息肉状病变）。脉络膜血管都清晰可见在WT和HTRA1老鼠在这个早期填充在ICG染料的阶段。在中间阶段，hyperfluorescent?…

Discussion

在这项研究中，我们演示了使用ICGA的图像脉络膜病变HTRA1转基因小鼠。的早，中，并在我们的小鼠模型ICGA后期阶段的特征在人类研究中¹匹配的时间过程很好。这一点很重要，使人体病理学和动物的表型，这是无价的对相关的脉络，例如AMD的条件病理生理机制和治疗策略研究之间作出比较。

我们首先进行ICGA小鼠IP注射，发现的时间过程是从小鼠到小鼠高度可变的，这?…

Materials

Spectralis Multi-Modality Imaging System	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	for dilation of pupils
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	clear lubricant eye gel
Ketamine	Vedco Inc	NDC 50989-996-06
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236
Acepromazine	Vedco Inc	NDC 50989-160-11
32-G Needle	Steriject	PRE-32013
1-ml syringe	BD	309659
Indocyanine Green	Pfaltz & Bauer	I01250