JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Risultati
Discussion
Divulgazioni
Acknowledgements
Materials
Riferimenti
Traduzione automatica
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Neuroscienze

Upptäckt av arvsmassan och Avskrifter av en beständig DNA-virus i neuronala vävnader från lysrör In situ Hybridisering Kombinerat med immunfärgning

Published: January 23, 2014
doi:
10.3791/51091
, , ,
1Virus and Centromere Team, Centre de Génétique et Physiologie Moléculaire et Cellulaire,CNRS UMR 5534, 2Université de Lyon 1, 3Laboratoire d’excellence,LabEX DEVweCAN, 4Institut de Virologie Moléculaire et Structurale,CNRS UPR 3296, 5Centre de Recherche en Cancérologie de Lyon, INSERM U1052,CNRS UMR 5286

Summary

Vi etablerade en fluorescent in situ hybridisering protokoll för detektion av en ihållande DNA-virusgenom i vävnadssnitt från djurmodeller. Detta protokoll möjliggör att studera infektionsprocessen genom codetection av det virala genomet, dess RNA-produkter, och virala eller cellulära proteiner i enstaka celler.

Abstract

Single cell codetection av en gen, är dess RNA-produkt och cellulära regulatoriska proteiner kritiska för att studera genuttryck reglering. Detta är en utmaning inom virologi, särskilt för kärnrepliker ihållande DNA-virus som involverar djurmodeller för deras studie. Herpes simplex virus typ 1 (HSV-1) fastställs en livslång latent infektion i perifera nervceller. Latent virus fungerar som reservoar, från vilken den reaktiverar och framkallar en ny herpetic episod. Den cellbiologi av HSV-1 latens fortfarande dåligt kända, delvis på grund av att det saknas metoder för att påvisa HSV-1-genom in situ i djurmodeller. Vi beskriver en DNA-fluorescent in situ hybridisering (FISH) tillvägagångssätt effektivt upptäcka låg-kopierings virala genom inom delar av neuronala vävnader från infekterade djurmodeller. Metoden bygger på värmebaserad antigen avslöjande, och direkt märkta hemgjorda DNA-prober, eller kommersiellt tillgängliga sonder. Vi utvecklade en trippel staining metod som kombinerar DNA-FISH med RNA-FISH och immunofluorescens, med hjälp av peroxidas baserad signalförstärkning för att tillgodose varje färgningsbehov. En stor förbättring är möjligheten att få, inom 10 um vävnadssnitt, låg-bakgrundssignaler som kan avbildas med hög upplösning genom konfokalmikroskopi och brett fält konventionell epifluorescence. Dessutom fungerade trippelfärgning med ett brett spektrum av antikroppar riktade mot cellulära och virala proteiner. Det kompletta protokollet tar 2,5 dagar att rymma antikropp och sond penetration i vävnaden.

Introduction

Herpes simplex virus typ 1 (HSV-1) är en ihållande mänsklig neurotrop virus, upprättande av en långsiktig latent infektion i nervceller i trigeminala ganglier (TG) i det perifera nervsystemet, från vilket det aktiverar jämna mellanrum för att replikera och spridning. HSV-1-genomet är en 150 kb dsDNA Lokalisera i kärnan av den mottagande neuron där det förblir så multikopie chromatinized plasmider, som inte integreras i värdcellsgenomet 1,2. Under latens är HSV-1 replikativa cykeln genetiska programmet starkt undertryckt, och genuttryck begränsas till den latens-associerad transkript (LAT)-lokuset, från latens anläggning till initiering av reaktive 3. LAT producerar en lång 8,5 kb icke-kodande RNA bearbetas till en stor 2 kb stabil lariat, och flera miRNA 4-7. HSV-1 latens är således kännetecknas av närvaron av det virala genom-DNA, LAT-RNA, och frånvaro av detekterbara replikativa cykelproteiner.

ontent "> Djurmodeller, främst mus och kanin, är experimentella modeller rekapitulera flera funktioner i latens i människa. En av de viktigaste intressena för dessa modeller är att de tillåter att studera fysiologiska aspekter av HSV-1 latens i immunkompetenta värdar. Under de senaste decennierna , många experimentella verktyg, såsom genetiskt modifierade virus och möss, har utvecklats för att studera fysiologi, genetik och cellbiologi av HSV-1 latens, från djurvävnader. Hittills har virala genom-DNA detekteras och kvantifieras genom Southern blöt och qPCR från dissocierade TGs. Det finns dock för närvarande ingen metod tillgänglig för att påvisa HSV-1-genomet med in situ hybridisering på vävnadssnitt 8. Följaktligen latens rutinmässigt bedömts histologiska sektioner genom detektering av LAT RNA av RNA in situ hybridisering snarare än virusgenom upptäckt. Eftersom det har varit omöjligt att karakterisera infekterade celler baserat på förekomst av virusgenom, this teknisk begränsning har varit en stor nackdel för analysen av många aspekter av värd-virusinteraktioner, såsom förhållandet mellan det virala genomet och cellulär och viral genuttryck eller värdcellförmedlade immunsvar 9,10.

Viktigast cell-till-cell heterogenitet av latent infektion är relativt outforskat och har visat sig vara en viktig del av latens i möss och i mänskliga sensoriska ganglieneuroner implanteras i SCID-möss 11-17. Typiskt visades det genom qPCR att HSV-1-genomet kopietal per cell varierar från 5 till flera hundra. Även LAT visas som en viktig regulator av latens och reaktivering, qPCR uppgifter om isolerade nervceller och in situ-PCR visade att endast en delmängd av latent infekterade nervceller, så lite som 30%, uttrycker LAT locus 11,12,18-21. Hur värdcellen och den cellulära miljön inuti vävnaden påverkar viruset latens upprättande ochviral genuttryck är fortfarande oklart. Här beskriver vi ett robust fluorescent in situ hybridisering (FISH) metod för effektiv detektion av låg-kopia HSV-1 iskt DNA inom djur neuronala vävnadssnitt. Denna metod har utformats och används av oss för att få tillgång till hög upplösning mikroskopi avbildning som är nödvändig för att studera interaktionen av det virala genomet med värdcell inom nukleära komponenter 22. Dessutom beskriver vi ett flertal färgningsmetod för samtidig detektion av det virala DNA: t med RNA och proteiner, vilket är ett unikt verktyg för att beskriva virus-värd interaktioner som reglerar viral genexpression. Metoden kan också användas för ett brett spektrum av analyser som kräver detektion av HSV-1 latenta genomet, till exempel kvantifiera smittade nervceller i stort antal avsnitt. Ett viktigt steg är att applicera antigenåtervinning behandling för att göra den virala DNA tillgängliga för hybridisering. Således kan detta protokoll också vara effektivt för att upptäckaav andra dsDNA virus, som för närvarande inte upptäckas med konventionella DNA-FISH metoder inom djurvävnader.

Protocol

Denna metod användes i en studie som tidigare 22 publicerats. Allmän bakgrund och beskrivning av konventionell manipulation på ISH, IF-och FISH, föreslår vi följande tillgänglig litteratur 23. 1. Animal Infektion Alla förfaranden som involverar försöksdjur inordna sig till etiska frågor från Föreningen för forskning i Vision och Oftalmologi (ARVO) uttalande om att använda djur i forskningen, och har godkänts av den lokala etisk…

Representative Results

Efter flera månader av omfattande tester, upptäckte vi att värmebaserad kemisk avslöjande gjorde latent HSV-1-genomet tillgänglig för fluorescent in situ hybridisering. Under processen, försökte vi olika avslöjande förfaranden, och endast värmebaserade behandlingar (dvs. uppvärmning av avsnitten fram till under kokpunkten i en mikrovågsugn) verkade effektivt. Vi testade därefter ett antal saltbuffertar som rutinmässigt används i immunohistokemi (IHC) och elektronmikroskopi för att häm…

Discussion

Protokollet som beskrivs här medger detektion av HSV-1 latent genomet inom neuroner i mus neuronala vävnadssektioner. Vår förståelse av de signalvägar som reglerar viral genuttryck har begränsats av bristen på metod för att påvisa HSV-1 iskt DNA på plats inom neuronala vävnader. Information om genomet kopior antal och andel infekterade nervceller kom främst från PCR-analys på dissocierade nervceller 11,12. Vid belysa rollen värd-cellkärnor arkitektur på HSV-1 latens, vi satt att bes…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Vi tackar N. Sawtell (Cincinnati Childrens Hospital Medical Center, Cincinnati, Ohio, USA), S. Efstathiou (University of Cambridge, Storbritannien) och James Hill (LSU Health Sciences Center, New Orleans, USA) för att tillhandahålla prover från HSV-1 -infekterade möss och kaniner, respektive, och för reagens, H. Masumoto (Kazusa DNA Research Institute, Chiba, Japan) och S. Khochbin (Institut Albert Bonniot, Grenoble, Frankrike) för bra diskussioner.

Detta arbete har finansierats genom anslag från Centrum National de la Recherche Scientifique (CNRS) (ASPETS program, till PL, http://www.cnrs.fr), det franska nationella forskningsinstitut (ANR) (ANR-05-MIIM- 008-01, CENTROLAT, http://www.agencenationale-recherche.fr ), varvid FINOVI Foundation ( http://www.finovi.org/:fr:start ), varvid Labex DEVweCAN (ANR-10-LabX-61 ) av Université de Lyon, inom programmet "Investissements d'Avenir "(ANR-11-IDEX-0007) som drivs av ANR ( http://www.agence-nationale-recherche.fr ), l'Association pour la Recherche contre le Cancer (ARC-7979 och ARC- 4910, http://www.arc-cancer.net ), la Ligue Nationale Contre le Cancer (LNCC, http://www.ligue-cancer.net ) och Inca (EPIPRO programmet http://www.e -cancer.fr ). FC och PL är CNRS forskare.

Materials

Balb/c mice Janvier, France 6 week-old females
HSV-1 strains SC16 strain (wild type) See Labetoule, M. et al. (2003) Invest Ophthalmol Vis Sci 44: 217–225, for details on HSV-1 strain and virus stock preparation.
Ketamine hydrochloride Sigma K2753 Intraperitoneal injection of a solution containing Ketamine (100mg/kg) and Xylazine (10mg/kg)
Xylazine hydrochloride Sigma X1251
Paraformaldehyde (PFA) Sigma 158127 Suspend 4g of PFA in 90mL of water. Add 50µL of 1N NaOH, and heat at 60°C in a water bath with agitation. PFA dissolves in about 30min. Add 10mL of 10X PBS. This solution can be prepared in advance and stored at -20 °C in 5mL tubes. Caution. Manipulate under a fume hood.
Physiological Saline Sigma 07982-100TAB-F
1X PBS, pH 7.4 (sterile) Life Technologies 10010-015
Sucrose Sigma 84100 Prepare a 20% sucrose solution in 1X PBS.
Cryosectionning embedding medium – Tissue-Tek OCT Compound – SAKURA 4583
Large vector DNA purification kit Qiagen 12462 To purify Cosmid or BAC vector containing HSV-1 genome and store at -20°C
Nick translation kit Roche Applied Sciences 10 976 776 001
Cy3-dCTP GE Healthcare PA53021 Protect from light
0.5M EDTA Sigma E6758
G50 Mini spin column GE Healthcare 27-5330-01
Salmon sperm DNA 10mg/mL Invitrogen / Life Technologies 15632-011
Ethanol molecular biology grade Sigma 87047 Prepare a 70% solution
Salmon sperm DNA Invitrogen / Life Technologies 15632-011
Formamid Molecular biology grade Sigma F9037 Caution. Manipulate under fume hood.
HSV-1 biotinylated commercial probe Enzo Life Sciences ENZ-40838
ImmEdge hydrophobic pen Vector Laboratories H-4000
20X Saline Sodium Citrate (SSC) Sigma S6639 Prepare a 2X SSC solution in ddH20.
Triton X-100 Sigma T8787 Prepare a 10% stock solution in water and store at +4°C. Prepare the 0.5% solution in 1X PBS right before use.
10mM sodium citrate pH 6.0 Sigma S1804 Prepare a 100mM stock solution (10X). Weigh 10,5g of citric acid (MW 210.14. Caution, irritant and toxic, wear appropriate mask and gloves), and dissolve in 400mL water. Adjust pH at 6.0 with 1N NaOH (caution, irritant, wear gloves). Adjust to 500mL with distilled water. Dilute 10 times in distilled water before use.
Acetic Acid Sigma 320099
Methanol, molecular biology grade Sigma 322415
Dextran sulfate – MW 500 000 Euromedex EU0606-A
Denhardt's solution (100X) Euromedex 1020-A
Rubber Cement "FixoGum" Marabut 290110000
DNA purification kit – Qiaquick PCR purification kit – Qiagen 28104
T7 in vitro transcription kit Ambion / Life Technologies AM1314
Biotin-16-UTP Roche Applied Sciences 11388908910
RNA purification mini-column Qiagen 73404
Ribonucleoside Vanadyl Complex New England Biolabs S1402S
H2O2 Sigma H3410 Prepare a 3% solution in distilled water. Store at +4 °C and protect from light.
Yeast tRNA Invitrogen 15401011 prepare a 10mg/mL solution in RNAse free water
Normal Goat Serum Invitrogen PCN5000
Primary antibodies Any supplier The following primary antibodies were used in the result section: anti-mouse CENP-A (rabbit mAb C51A7, Cell Signaling Technologies), and anti-ATRX H-300 (Santa Cruz Biotechnology)
Secondary fluorescent antibodies Invitrogen / Life Technologies The fluorescent secondary antibodies routinely used in our protocol are AlexaFluor labeled goat antibodies (IgG H+L). The antibody used in the result section is an anti-rabbit goat antibody labaled with AlexaFluor 488 (reference A11001)
Tyramide Signal Amplification (TSA) kit – Streptavidin + AlexaFluor 350 (blue fluorescence) Invitrogen / Life Technologies #T20937 TSA kits are also available from Perkin Elmer
Tyramide Signal Amplification (TSA) kit – Streptavidin + AlexaFluor 488 (green fluorescence) Invitrogen / Life Technologies #T20932
Hoechst 33342 Invitrogen / Life Technologies H3570 Prepare a 0.5µg/mL solution in 1X PBS immediatly before use. Discard the remaining solution.
22x50mm coverslip. n°1.5 glass. Electron Microscopy Sciences 72204-04
Mounting medium with anti-fading agent – Vectashield – Vector Laboratories H-1000 Another conventional product is Fluoromount G from electron microscopy Science
Superfrost glass slides FisherScientific 12-550-15
EQUIPMENT
Equipment / material Company Reference Note
Needle for infection Glass micropipette hot drawn. Home made.
Dissection equipement Moria, France Microsurgical scissors and forceps
Peristaltic pump Cole Palmer Instruments Easyload Masterflex
Micro-syringe pump device (Nano Pump) kdScientific KDS310
Cryostat Leica France CM 1510-1
-80 °C freezer Sanyo Ultra Low -80°C
Domestic microwave oven
Dry block heater Eppendorf 022670204
Incubator Slide moat Boekel Scientific 240000
Coplin Jar Dominique Dutscher 68512
Staining glass container Dominique Dutscher 68506
Fluorescent microscope Zeiss The images presented in the result section were collected with a Zeiss AxioObserver with objective x40 LD NeoFluor N.A 0.6, and x100 PlanApochromat N.A 1.3. Filter set #38, #43 and #43. HXP 120 fluorescence light source. Photometrics CoolSNAP HQ2 CCD camera. Signal will be more easily observed on a recent high efficiency microscope such as Zeiss AxioImager/AxioObserver series, Nikon Ti-E/Ni-E series or Leica DM/DMI6000 series

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Riferimenti

  1. Knipe, D. M., Cliffe, A. Chromatin control of herpes simplex virus lytic and latent infection. Nat. Rev. Microbiol. 6 (3), 211-221 (2008).
  2. Bloom, D. C., Giordani, N. V., Kwiatkowski, D. L. Epigenetic regulation of latent HSV-1 gene expression. Biochim. Biophys. Acta. 1799 (3-4), 3-4 (2010).
  3. Stevens, J. G., Wagner, E. K., Devi-Rao, G. B., Cook, M. L., Feldman, L. T. RNA complementary to a herpesvirus alpha gene mRNA is prominent in latently infected neurons. Science. 235 (4792), 1056-1059 (1987).
  4. Zwaagstra, J., Ghiasi, H., Nesburn, A. B., Wechsler, S. L. In vitro promoter activity associated with the latency-associated transcript gene of herpes simplex virus type 1. J. Gen. Virol. 70, 2163-2169 (1989).
  5. Farrell, M. J., Dobson, A. T., Feldman, L. T. Herpes simplex virus latency-associated transcript is a stable intron. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (3), 790-794 (1991).
  6. Umbach, J. L., Kramer, M. F., Jurak, I., Karnowski, H. W., Coen, D. M., Cullen, B. R. MicroRNAs expressed by herpes simplex virus 1 during latent infection regulate viral mRNAs. Nature. 454 (7205), 780-783 (2008).
  7. Jurak, I., Kramer, M. F., et al. Numerous conserved and divergent microRNAs expressed by herpes simplex viruses 1 and 2. J. Virol. 84 (9), 4659-4672 (2010).
  8. Wagner, E. K., Bloom, D. C. Experimental investigation of herpes simplex virus latency. Clin. Microbiol. Rev. 10 (3), 419-443 (1997).
  9. Held, K., Junker, A., et al. Expression of herpes simplex virus 1-encoded microRNAs in human trigeminal ganglia and their relation to local T-cell infiltrates. J. Virol. 85 (19), 9680-9685 (2011).
  10. Held, K., Eiglmeier, I., et al. Clonal expansions of CD8⁺ T cells in latently HSV-1-infected human trigeminal ganglia. J. Neurovirol. 18 (1), 62-68 (2012).
  11. Sawtell, N. M. Comprehensive quantification of herpes simplex virus latency at the single-cell level. J. Virol. 71 (7), 5423-5431 (1997).
  12. Sawtell, N. M., Poon, D. K., Tansky, C. S., Thompson, R. L. The latent herpes simplex virus type 1 genome copy number in individual neurons is virus strain specific and correlates with reactivation. J. Virol. 72 (7), 5343-5350 (1998).
  13. Bertke, A. S., Swanson, S. M., Chen, J., Imai, Y., Kinchington, P. R., Margolis, T. P. A5-positive primary sensory neurons are nonpermissive for productive infection with herpes simplex virus 1 in vitro. J. Virol. 85 (13), 6669-6677 (2011).
  14. Bertke, A. S., Ma, A., Margolis, M. S., Margolis, T. P. Different mechanisms regulate productive herpes simplex virus 1 (HSV-1) and HSV-2 infections in adult trigeminal neurons. J. Virol. 87 (11), 6512-6516 (2013).
  15. Kobayashi, M., Kim, J. Y., et al. A primary neuron culture system for the study of herpes simplex virus latency and reactivation. J. Vis. Exp. (62), (2012).
  16. Kim, J. Y., Mandarino, A., Chao, M. V., Mohr, I., Wilson, A. C. Transient reversal of episome silencing precedes VP16-dependent transcription during reactivation of latent HSV-1 in neurons. PLoS Pathog. 8 (2), (2012).
  17. Zerboni, L., Che, X., Reichelt, M., Qiao, Y., Gu, H., Arvin, A. Herpes simplex virus 1 tropism for human sensory ganglion neurons in the severe combined immunodeficiency mouse model of neuropathogenesis. J. Virol. 87 (5), 2791-2802 (2013).
  18. Mehta, A., Maggioncalda, J., et al. In situ DNA PCR and RNA hybridization detection of herpes simplex virus sequences in trigeminal ganglia of latently infected mice. Virology. 206 (1), 633-640 (1995).
  19. Chen, X. -. P., Mata, M., Kelley, M., Glorioso, J. C., Fink, D. J. The relationship of herpes simplex virus latency associated transcript expression to genome copy number: a quantitative study using laser capture microdissection. J. Neurovirol. 8 (3), 204-210 (2002).
  20. Proenca, J. T., Coleman, H. M., Connor, V., Winton, D. J., Efstathiou, S. A historical analysis of herpes simplex virus promoter activation in vivo reveals distinct populations of latently infected neurones. J. Gen. Virol. 89, 2965-2974 (2008).
  21. Nicoll, M. P., Proença, J. T., Connor, V., Efstathiou, S. Influence of herpes simplex virus 1 latency-associated transcripts on the establishment and maintenance of latency in the ROSA26R reporter mouse model. J. Virol. 86 (16), 8848-8858 (2012).
  22. Catez, F., Picard, C., et al. HSV-1 Genome Subnuclear Positioning and Associations with Host-Cell PML-NBs and Centromeres Regulate LAT Locus Transcription during Latency in Neurons. PLoS Pathog. 8 (8), (2012).
  23. Solovei, I., Grasser, F., Lanctôt, C. FISH on Histological Sections. CSH Protoc. , (2007).
  24. Labetoulle, M., Kucera, P., et al. Neuronal propagation of HSV1 from the oral mucosa to the eye. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41 (9), 2600-2606 (2000).
  25. Labetoulle, M., Maillet, S., Efstathiou, S., Dezelee, S., Frau, E., Lafay, F. HSV1 latency sites after inoculation in the lip: assessment of their localization and connections to the eye. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44 (1), 217-225 (2003).
  26. Maillet, S., Naas, T., et al. Herpes simplex virus type 1 latently infected neurons differentially express latency-associated and ICP0 transcripts. J. Virol. 80 (18), 9310-9321 (2006).
  27. Tanaka, M., Kagawa, H., Yamanashi, Y., Sata, T., Kawaguchi, Y. Construction of an excisable bacterial artificial chromosome containing a full-length infectious clone of herpes simplex virus type 1: viruses reconstituted from the clone exhibit wild-type properties in vitro and in vivo. J. Virol. 77 (2), 1382-1391 (2003).
  28. Gierasch, W. W., Zimmerman, D. L., Ward, S. L., Vanheyningen, T. K., Romine, J. D., Leib, D. A. Construction and characterization of bacterial artificial chromosomes containing HSV-1 strains 17 and KOS. J. Virol. Methods. 135 (2), 197-206 (2006).
  29. Nagel, C. -. H., Döhner, K., et al. Nuclear egress and envelopment of herpes simplex virus capsids analyzed with dual-color fluorescence HSV1(17). J. Virol. 82 (6), 3109-3124 (2008).
  30. Arthur, J., Efstathiou, S., Simmons, A. Intranuclear foci containing low abundance herpes simplex virus latency-associated transcripts visualized by non-isotopic in situ hybridization. J. Gen. Virol. 74, 1363-1370 (1993).
  31. Pileri, S. A., Roncador, G., et al. Antigen retrieval techniques in immunohistochemistry: comparison of different methods. J. Pathol. 183, 116-123 (1997).
  32. Saito, N., Konishi, K., Takeda, H., Kato, M., Sugiyama, T., Asaka, M. Antigen retrieval trial for post-embedding immunoelectron microscopy by heating with several unmasking solutions. J. Histochem. Cytochem. 51 (8), 989-994 (2003).
  33. Ishov, A. M., Maul, G. G. The periphery of nuclear domain 10 (ND10) as site of DNA virus deposition. J. Cell Biol. 134 (4), 815-826 (1996).
  34. Sourvinos, G., Everett, R. D. Visualization of parental HSV-1 genomes and replication compartments in association with ND10 in live infected cells. EMBO J. 21 (18), 4989-4997 (2002).
  35. Everett, R. D., Murray, J., Orr, A., Preston, C. M. Herpes simplex virus type 1 genomes are associated with ND10 nuclear substructures in quiescently infected human fibroblasts. J. Virol. 81 (20), 10991-11004 (2007).
  36. Margolis, T. P., Imai, Y., Yang, L., Vallas, V., Krause, P. R. Herpes simplex virus type 2 (HSV-2) establishes latent infection in a different population of ganglionic neurons than HSV-1: role of latency-associated transcripts. J. Virol. 81 (4), 1872-1878 (2007).
  37. Imai, Y., Apakupakul, K., Krause, P. R., Halford, W. P., Margolis, T. P. Investigation of the mechanism by which herpes simplex virus type 1 LAT sequences modulate preferential establishment of latent infection in mouse trigeminal ganglia. J. Virol. 83 (16), 7873-7882 (2009).
  38. Shi, S. -. R., Shi, Y., Taylor, C. R. Antigen retrieval immunohistochemistry: review and future prospects in research and diagnosis over two decades. J. Histochem. Cytochem. 59 (1), 13-32 (2011).
  39. Lu, X., Triezenberg, S. J. Chromatin assembly on herpes simplex virus genomes during lytic infection. Biochim. Biophys. Acta. 1799 (3-4), 217-222 (2010).
  40. Placek, B. J., Berger, S. L. Chromatin dynamics during herpes simplex virus-1 lytic infection. Biochim. Biophys. Acta. 1799 (3-4), 223-227 (2010).
  41. Eshleman, E., Shahzad, A., Cohrs, R. J. Varicella zoster virus latency. Future Virol. 6 (3), 341-355 (2011).
  42. Paulus, C., Nitzsche, A., Nevels, M. Chromatinisation of herpesvirus genomes. Rev. Med. Virol. 20 (1), 34-50 (2010).
  43. Nitzsche, A., Paulus, C., Nevels, M. Temporal dynamics of cytomegalovirus chromatin assembly in productively infected human cells. J. Virol. 82 (22), 11167-11180 (2008).
  44. Zhou, J., Chau, C. M., et al. Cell cycle regulation of chromatin at an origin of DNA replication. EMBO J. 24 (7), 1406-1417 (2005).
  45. Day, L., Chau, C. M., Nebozhyn, M., Rennekamp, A. J., Showe, M., Lieberman, P. M. Chromatin profiling of Epstein-Barr virus latency control region. J. Virol. 81 (12), 6389-6401 (2007).
  46. Arvey, A., Tempera, I., Lieberman, P. M. Interpreting the Epstein-Barr Virus (EBV) Epigenome Using High-Throughput Data. Viruses. 5 (4), 1042-4254 (2013).
  47. Lu, F., Day, L., Gao, S. -. J., Lieberman, P. M. Acetylation of the latency-associated nuclear antigen regulates repression of Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus lytic transcription. J. Virol. 80 (11), 5273-5282 (2006).
  48. Günther, T., Grundhoff, A. The epigenetic landscape of latent Kaposi sarcoma-associated herpesvirus genomes. PLoS Pathog. 6 (6), (2010).
  49. Toth, Z., Maglinte, D. T., et al. Epigenetic analysis of KSHV latent and lytic genomes. PLoS Pathog. 6 (7), (2010).

Tags

DNA-FISHRNA-FISHImmunofluorescenceHSV-1LatencyGene Expression RegulationSingle Cell Analysis
check_url/it/51091?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citazione di questo articolo
Catez, F., Rousseau, A., Labetoulle, M., Lomonte, P. Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining. J. Vis. Exp. (83), e51091, doi:10.3791/51091 (2014).
Scarica citazione
Ristampe e autorizzazioni

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image