Vestibulaire schwannomes (VSS) sont des tumeurs non malignes de cellules de Schwann (SC) origine, associées à des mutations dans le gène suppresseur de tumeur NF2. Nous rapportons, un protocole efficace et reproductible pour l'homme primaire VS culture cellulaire qui permet la manipulation et l'analyse expérimentale moléculaire et cellulaire et récapitule la nature hétérogène de la maladie humaine.
Schwannomes vestibulaires (VSS) représentent cellules de Schwann (SC) des tumeurs du nerf vestibulaire, compromettre 10% de toutes les tumeurs intracrâniennes. Commutateurs virtuels se produisent dans (la neurofibromatose de type 2, NF2) soit formes sporadiques ou familiales, à la fois liés à des défauts d'inactivation du gène suppresseur de tumeur NF2 gène. Le traitement de VSS est généralement la résection chirurgicale ou la radiochirurgie, mais la morbidité de ces procédures a conduit des enquêtes sur des traitements moins invasifs. Historiquement, le manque d'accès à des échantillons de tissus frais et le fait que les cellules ne sont pas schwannome immortalisées ont considérablement entravé l'utilisation de cultures primaires d'enquête de schwannome tumorigenèse. Pour remédier à la quantité limitée de cultures primaires, la lignée cellulaire immortalisée HEI193 VS a été générée par transduction avec le HPV oncogènes E6 et E7. Cette transduction oncogène introduit altérations moléculaires et phénotypiques importantes pour les cellules, ce qui limite leur utilisation comme un modèle pour s humainestumeurs du chwannoma. Nous illustrons donc un protocole reproductible simplifiée pour la culture de cellules primaires humaines VS. Cette technique facile à maîtriser permet enquêtes moléculaires et cellulaires qui récapitulent plus précisément de la complexité de la maladie VS.
Schwannomes vestibulaires (VSS) représentent cellules de Schwann (SC) des tumeurs du nerf vestibulaire, compromettre 10% de toutes les tumeurs intracrâniennes 1-3. Commutateurs virtuels se produisent dans (la neurofibromatose de type 2, NF2) soit formes sporadiques ou familiales, à la fois liés à des défauts d'inactivation du gène suppresseur de tumeur NF2 gène. Le traitement de VSS est généralement la résection chirurgicale ou la radiochirurgie, mais la morbidité de ces procédures comprend la surdité, les neuropathies faciales, fuite de liquide céphalo-rachidien, le déséquilibre, et la repousse de la tumeur 1. En outre tous les patients sont candidats à la chirurgie ou de radiothérapie acceptables. Cette morbidité ainsi que le manque de thérapies alternatives a conduit une enquête sur la biologie moléculaire unique de commutateurs virtuels dans l'espoir de développer de nouveaux traitements 3,4.
La culture cellulaire permet une analyse rapide, facile, et en profondeur du comportement et de criblage moléculaire et cellulaire de com thérapeutique potentiellelivres. Historiquement, le manque d'accès à des échantillons de tissus frais et le fait que les cellules ne sont pas schwannome immortalisées ont considérablement entravé l'utilisation de cultures primaires d'enquête de schwannome tumorigenèse. Pour remédier à la quantité limitée de cultures primaires, la lignée cellulaire immortalisée HEI193 VS a été générée par transduction avec E6 et E7 de HPV oncogènes 5. Cette transduction oncogène introduit altérations moléculaires et phénotypiques importantes pour les cellules, ce qui limite leur utilisation comme un modèle pour les tumeurs de schwannome humaines. cultures SC issus de lignées de souris transgéniques qui n'ont pas un gène NF2 fonctionnelle représentent une autre alternative pour enquêter NF2 dépendant tumorigenèse SC in vitro. Ces cultures mais ne parviennent pas à récapituler la nature hétérogène des commutateurs virtuels humain ou d'un compte d'un comportement humain spécifique. La plupart des techniques antérieures de culture VS tenus temps de traitement relativement longs et les techniques de culture sélective complexes 6-8.Nous présentons ici un protocole simple, reproductible pour principal VS culture cellulaire avec un traitement complet en moins de 3 heures, avec 95% de pureté des cellules tumorales tel que déterminé par immunomarquage.
Histoire de cultures in vitro dans Schwannome
Les efforts visant à établir dans les cultures de schwannome in vitro ont commencé quelques décennies après la neurinome de l'acoustique initiale résection chirurgicale ouverte a eu lieu en 1894 12. Les premières cultures enregistrées étaient par Kredel dans les années 1920, qui a tenté en vain de se développer tumeur hachée par "méthode de la goutte suspendue" <su…
The authors have nothing to disclose.
Support: NIDCD R01DC009801, P30DC010362, 5T32DC000040-17
Poly-L-Ornithine, 0.01% Solution | Sigma | P4957 | Cell Culture Surface Treatment |
Laminin Mouse Protein | Gibco | 23017-015 / L2020 | Cell Culture Surface Treatment |
0.2% Collagenase (dissolved in HBSS -/-) | Sigma | C2674 | Dissociation Reagent |
0.25% Trypsin | Gibco | 25200-056 | Dissociation Reagent |
TPS 100mm Round Culture Dish | Midwest Scientific | TP93100 | |
Permanox 4 well slide | Fisher Scientific | 1256521 | |
Permanox 8 well slide | Fisher Scientific | 1256522 | |
Suction Filter Flask | Midwest Scientific | TP99500 | |
15ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91015 | |
50ml Conical Tube | Midwest Scientific | TP91050 | |
2mL Round Bottom Tube | USA Scientific | 1620-2700 | |
Small Scissor | FST | 14058-11 | |
Small Forceps | FST | 11251-20 | |
Scalpel Handle | FST | 10004-13 | |
#11 Scalpel Blade | Roboz | RS-9801-11 | |
Non-Tissue Culture 100mm Round Petri Dish | Fisher Scientific | 50-820-904 | |
P1000 Pipetteman | Bioexpress | P3963-1000 | |
Serological Pipetteman | Bioexpress | R3073-2P | |
Sterile, Non-Filtered P1000 Pipette Tips | Midwest Scientific | TD1250R | |
Insulated Ice Cooler | |||
Culture Hood | Baker | ||
Centrifuge | Eppendorf -5810R | ||
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) +/+ (w/ Ca2+, Mg2+) | Gibco | 24020-117 | Schwannoma Culture and Media Components |
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) -/- (w/out Ca2+, Mg2+) | Gibco | 14170-112 | Schwannoma Culture and Media Components |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM), High Glucose, w/ Phenol Red | Gibco | 11965-092 | Schwannoma Culture and Media Components |
N2 Supplement | Gibco | 17502-048 | Schwannoma Culture and Media Components |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | Schwannoma Culture and Media Components |
Penicillin – Streptomycin | Gibco | 15140-163 | Schwannoma Culture and Media Components |
Bovine Insulin (1mg/ml 200x) | Sigma | I6634 | Schwannoma Culture and Media Components |