Um método melhorado para rápido e preciso de medição de desempenho em vôo<em> Drosophila</em
Summary
Aqui nós descrevemos um método para a medição rápida e precisa do desempenho de vôo em Drosophila, permitindo seleção de alto rendimento.
Abstract
Drosophila provou ser um sistema modelo útil para a análise de comportamento, incluindo o vôo. O testador vôo caindo envolvido inicial voa em uma revestido a óleo cilindro graduado; altura de desembarque prevista uma medida de desempenho de vôo, avaliando como moscas longe vai cair antes de produzir o suficiente impulso para fazer contato com a parede do cilindro. Aqui nós descrevemos uma versão atualizada do testador de vôo com quatro grandes melhorias. Primeiro, nós adicionamos um "tubo de queda" para garantir que todas as moscas entrar no cilindro de vôo a uma velocidade semelhante entre ensaios, eliminando a variabilidade entre os usuários. Em segundo lugar, substituiu o revestimento de óleo com folhas de plástico removíveis revestidas em Emaranhado-Trap, um adesivo projetado para capturar insetos vivos. Em terceiro lugar, nós usamos um cilindro de mais tempo para permitir a discriminação mais precisa da capacidade de vôo. Em quarto lugar, usamos uma câmera digital e software de imagem para automatizar a marcação de desempenho de vôo. Estas melhorias permitem o rapid, avaliação quantitativa do comportamento de vôo, útil para grandes conjuntos de dados e telas genéticos de larga escala.
Introduction
Drosophila tem sido utilizado para estudar a base genética de comportamento 1, e os investigadores desenvolveram um número de maneiras para analisar vários tipos de comportamento 2-6. As moscas têm sido particularmente úteis no fornecimento de modelos úteis de distúrbios neuromusculares 7. Um ensaio comum usado para estudar o comportamento locomotor é o desempenho de vôo. O testador vôo original é útil para identificar vôo mutantes defectivos e para a avaliação quantitativa da capacidade voo 1, mas tem várias deficiências que limitam a sua aplicação para as telas de alto rendimento: o uso de cilindros revestidos de petróleo é confuso e complicado, algumas funções, como o comprimento do cilindro e introdução de moscas para dentro do tubo com força variável reduzir a precisão quantitativa e é difícil de recuperar moscas vivo do testador. Para superar essas limitações, nós modificamos o testador vôo para incluir uma série de melhorias. Nós adicionamos uma "gota tuser "a introdução de moscas para eliminar a variabilidade entre experiências e os utilizadores. Usamos folhas de acrílico removível revestido com um adesivo que permite uma mais fácil limpeza e recuperação de moscas individuais. Temos aumentado o comprimento do tubo de voo para melhorar a exactidão quantitativa e fiabilidade. Finalmente , usamos uma câmera digital e software de imagem para calcular as alturas de pouso de moscas. Acreditamos que essas melhorias serão úteis para qualquer laboratório interessado na realização de telas genéticos de larga escala por defeitos no desempenho de vôo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Usando os métodos descritos aqui, temos sido capazes de avaliar rapidamente o desempenho de vôo de um grande número de mutantes de Drosophila, proporcionando maior eficiência do que era possível anteriormente. Para nossos experimentos, nós rotineiramente separar machos e fêmeas e criá-los em baixa densidade (menos de 20 moscas / frasco) para limitar a agressão que possa danificar asas. Outra consideração importante é controlar adequadamente as diferenças de desempenho de vôo, devido a diferenças …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health concede F32 NS078958 (DTB) e R01 AG033620 (BG).
Materials
| Putty knife | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Pine back band moulding ( x2 ) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
| Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Tangle Trap Insect Trap Coating | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Laptop Computer | Apple | _ | www.apple.com/mac/ |
| mineral oil | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| white poster board | Staples | 247403 | www.staples.com |
| polystyrene weighing dish | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | _ | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| digital camera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| fine forceps | Fine Science Tools | _ | www.finescience.com |
| polycarbonate cylinder (drop tube) | mcMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
| flight cylinder (acrylic) | mcMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| polycarbonate sheets | mcMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| ring stand (x2) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| ring support | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Three-prong extension clamps (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| funnel | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| chain clamps (x2) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| glass vials | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
Riferimenti
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