Une méthode améliorée pour la mesure précise et rapide des performances de vol en<em> Drosophila</em
Summary
Nous décrivons ici une méthode de mesure rapide et précise des performances de vol chez la drosophile, permettant le criblage à haut débit.
Abstract
Drosophila s'est avéré être un système de modèle utile pour l'analyse du comportement, y compris le vol. Le testeur de vol chute impliqué initiale vole dans une huile revêtu graduée; hauteur d'atterrissage a permis de mesurer les performances de vol en évaluant comment les mouches loin tomberont avant de produire une poussée suffisante pour prendre contact avec la paroi du cylindre. Nous décrivons ici une version mise à jour de l'appareil de contrôle de vol avec quatre améliorations majeures. Tout d'abord, nous avons ajouté un "tube de descente" de veiller à ce que toutes les mouches entrent dans le cylindre de vol à une vitesse similaire entre les essais, ce qui élimine la variabilité entre les utilisateurs. Deuxièmement, nous avons remplacé le revêtement de l'huile de feuilles de plastique amovibles revêtus de Tangle-Trap, un adhésif conçu pour capturer des insectes vivants. Troisièmement, nous utilisons un cylindre plus de permettre la discrimination plus précise de la capacité de vol. Quatrième nous utilisons un appareil photo numérique et des logiciels d'imagerie pour automatiser la notation des performances de vol. Ces améliorations permettent de rapIdentifiant, l'évaluation quantitative du comportement de vol, utile pour les grands ensembles de données et les écrans génétiques à grande échelle.
Introduction
Drosophila a longtemps été utilisée pour étudier la base génétique du comportement 1, et les chercheurs ont mis au point un certain nombre de façons d'analyser différents types de comportements 2-6. Les mouches ont été particulièrement utiles pour fournir des modèles utiles de troubles neuromusculaires 7. Un test couramment utilisé pour étudier le comportement locomoteur des performances de vol. Le testeur de vol initial est utile pour identifier les ponts mutants défectueux et pour l'évaluation quantitative de la capacité de vol 1, mais il a plusieurs inconvénients qui limitent son application pour les écrans à haut débit: l'utilisation de bouteilles enduites d'huile est salissant et fastidieux, certaines fonctionnalités telles que la longueur du cylindre et l'introduction des mouches dans le tube avec une force variable de réduire la précision quantitative, et il est difficile de récupérer vol direct à partir de l'appareil d'essai. Pour surmonter ces limitations, nous avons modifié le testeur de vol pour inclure un certain nombre d'améliorations. Nous avons ajouté un "drop tuêtre "d'introduire mouches pour éliminer la variabilité entre les expériences et les utilisateurs. Nous utilisons des feuilles d'acrylique amovibles recouvertes d'un adhésif qui permet de faciliter le nettoyage et la récupération de vol individuels. Nous avons augmenté la longueur du tube de vol d'améliorer la précision quantitative et de fiabilité. Enfin , nous utilisons un appareil photo numérique et des logiciels d'imagerie pour calculer les hauteurs d'atterrissage de vol. Nous croyons que ces améliorations seront utiles à tous les laboratoires intéressés à mener des écrans génétiques à grande échelle pour les défauts de performances de vol.
Protocol
Representative Results
Discussion
En utilisant les méthodes décrites ici, nous avons été en mesure d'évaluer rapidement les performances de vol d'un grand nombre de mutants de drosophile, offrant une plus grande efficacité qu'auparavant. Pour nos expériences, nous nous séparons systématiquement hommes et les femmes et les élever à faible densité (moins de 20 mouches / flacon) pour limiter l'agression qui pourrait endommager les ailes. Une autre considération importante est de bien contrôler les différences de perf…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par les Instituts nationaux de la santé accorde F32 NS078958 (DTB) et R01 AG033620 (BG).
Materials
| Putty knife | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Pine back band moulding ( x2 ) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
| Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Tangle Trap Insect Trap Coating | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Laptop Computer | Apple | _ | www.apple.com/mac/ |
| mineral oil | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| white poster board | Staples | 247403 | www.staples.com |
| polystyrene weighing dish | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | _ | http://rsb.info.nih.gov/ij/ |
| digital camera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| fine forceps | Fine Science Tools | _ | www.finescience.com |
| polycarbonate cylinder (drop tube) | mcMaster-Carr | 8585K62 | www.mcmaster.com |
| flight cylinder (acrylic) | mcMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| polycarbonate sheets | mcMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| ring stand (x2) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| ring support | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Three-prong extension clamps (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| funnel | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| chain clamps (x2) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| glass vials | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
Riferimenti
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