Vi presentiamo un test di scelta per rivelare l'influenza di odoranti sul comportamento Drosophila utilizzando un test Y-labirinto.
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In questo articolo
Sommario
Abstract
Rilevare i segnali dall'ambiente è essenziale per gli animali per garantire la loro sopravvivenza. A questo scopo, usano stimoli ambientali come la visione, mechanoreception, l'udito, e chemoperception attraverso il gusto, attraverso il contatto diretto o attraverso l'olfatto, che rappresenta la risposta ad una molecola instabile che agisce a lungo raggio. Molecole chimiche volatili sono segnali molto importanti per la maggior parte degli animali nella rilevazione di pericolo, una fonte di cibo, o per comunicare tra gli individui. Drosophila melanogaster è uno dei modelli biologici più comuni per gli scienziati di esplorare le basi cellulari e molecolari di olfatto. Al fine di evidenziare le capacità olfattive di questo piccolo insetto, descriviamo un protocollo scelta modificato in base al test Y-maze usato classico con i topi. I dati ottenuti con Y-labirinti forniscono informazioni preziose per comprendere meglio come gli animali che fare con il loro ambiente in perenne mutazione. Introduciamo un protocollo passo-passo per studiare laimpatto della odoranti sul fly risposta esplorativo da questo test Y-labirinto.
Introduzione
Chemoreception attraverso il gusto e l'olfatto è una modalità sensoriale fondamentale per la sopravvivenza degli animali. Dà segnali vitali necessarie per la rivelazione di un pericolo o fonti di cibo, così come per le interazioni sociali. Essa aiuta anche gli animali di trovare un partner sessuale necessaria per la loro riproduzione. Per più di 20 anni, un'intensa attività di ricerca, comprese Nobel vincitore del premio opera di Richard Axel e Linda Buck nel 2004 "per le loro scoperte di recettori olfattivi e l'organizzazione del sistema olfattivo", è stata effettuata per rivelare le basi molecolari e cellulari della olfatto 1,2.
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Protocollo
1. Prima di iniziare
- Utilizzare un archivio di riferimento isogenized cuscinetto fenotipi comportamentali stabili e robusti. Non esiste una regola generale per la scelta di questa azione, dal momento che tutti i controlli possibili possono portare sfondo eterogenei alleli.
- Utilizzare questo ceppo di controllo per backcross ogni altra azione necessaria per le fasi successive. Questo passo backcrossing è tipicamente rappresentato da almeno cinque croci successivi di una singola femmina vergine (per permettere possibile crossing-over tra cromosomi omologhi) per 2-3 isogeni maschi di riferimento 5. Questo passo è importante per omogeneizza....
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Risultati
Figura 1D mostra due risposte di rappresentanza di questo test Y-labirinto. Maschi Canton-S evitare fortemente 10% di acido acetico diluito in acqua distillata, mentre non evitano significativamente il 10% di acido fenilacetico. Questi test sono basati su 10 maschi per replica messi insieme nelle fiale di carico. Questo protocollo volte può portare a un notevole errore standard della media. Se necessario, è possibile ridurre questo inconveniente utilizzando 20 maschi per replicati anziché soltanto 10. M.......
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Discussione
Il nostro protocollo Y-labirinto è basato su un protocollo precedentemente descritto 9. Tuttavia, introduciamo due importanti differenze. In primo luogo, usiamo puntali delle pipette strette per evitare che le mosche di tornare una volta che decidono di entrare nel flaconcino contenente il solvente o il solvente più l'odorizzante. Questi suggerimenti strette sono utili anche per limitare la diffusione odorizzante in Y-labirinto. In secondo luogo, usiamo un carico flacone più piccolo per costringere le mos.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo 4 utenti anonimi per il loro lavoro per migliorare il manoscritto. Ringraziamo il Centre National de la Recherche Scientifique per il suo sostegno finanziario alle MBG e YG, e l'Université de Bourgogne e il Ministero della Ricerca francese MMS. La ricerca in laboratorio YG è finanziato dal Consiglio europeo della ricerca (ERC Starting Grant, GliSFCo-311.403), l'Agence Nationale de la Recherche (ANR-JCJC, GGCB-2010), il Conseil Régional de Bourgogne (Faber), e il CNRS.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Drosophila Tubo in polistirene | VWR europe | 734-2255 | 30 x 25 mm labirinto |
| Y Drosophila Tubo borosilicato | Digione verre | 95 X 25 mm labirinto | |
| a Y Tappo in schiuma | Dutscher | 999038 | labirinto a Y |
| Connettore a forma di Y | Europrix | 11020605 | labirinto a Y |
| 100-1.000 &; l. puntali per pipette | Corning | 4868 | Unire i seguenti puntali per pipette al connettore a forma di Y. Tagliare 2 puntali per pipette a 65 mm dall'estremità larga e collegare l'estremità stretta (con un ∼ 2 mm di apertura) a 2 fiale di test. Queste aperture limiteranno le inversioni a U una volta che le mosche entreranno nei tubi contenenti gli odori. Tagliare 1 punta della pipetta a 35 mm dall'estremità larga e collegarla alla fiala di caricamento. Y-maze |
| Far-Red LED Lampadina | Rubin-Lacaque | 0RB180238 | 625-630 nm |
| Acido acetico | Sigma-Aldrich | 45725 | |
| Acido fenilacetico | Sigma-Aldrich | P16621 | |
| Lievito | Sensient Aromi Strasburgo | 1018880464 | |
| Farina | di maiseurogerm | Farine de maï s | |
| Agar | Kalys | HP-697-25 | |
| Metil idrossi 4 benzoato | VWR international | 25605293 |
Riferimenti
- Mombaerts, P. Genes and ligands for odorant, vomeronasal and taste receptors. Nat. Rev. Neurosci. 5, 263-278 (2004).
- Silbering, A. F., Benton, R. Ionotropic and metabotropic mechanisms in chemoreception: 'chance or design. EMBO Rep. 11, 173-1....
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Ristampe e permessi
