يوفر القاطعة الماوس تزايد مستمر نموذجا لدراسة تجديد أنسجة الأسنان من الخلايا الجذعية الظهارية الأسنان (DESCs). وتفيد التقارير ان نظام قوي للباستمرار وبشكل موثوق الحصول على هذه الخلايا من القاطعة وتوسيعها في المختبر هنا.
فهم الآليات الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء تجديد الأسنان والتجديد أصبح موضوع اهتمام كبير 1-4، ويوفر الماوس القاطعة نموذجا لهذه العمليات. هذا الجهاز الرائع تنمو باستمرار طوال حياة الحيوان ويولد كل أنواع الخلايا اللازمة من أحواض نشطة من الخلايا الجذعية البالغة يضم في الشفة (الشفة نحو) واللغات (نحو اللسان) حلقة عنق الرحم (CL) المناطق. فقط الخلايا الجذعية الأسنان من CL شفوي تؤدي إلى خلايا تكوين المينا التي تولد المينا، والغطاء الخارجي للأسنان، على سطح شفوي. هذا التشكيل المينا غير المتماثلة يسمح التآكل في الطرف القاطعة، والأسلاف والخلايا الجذعية في القاطعة الداني ضمان أن أنسجة الأسنان تتجدد باستمرار. القدرة على عزل وزراعة هذه الخلايا الاصلية أو الجذعية في المختبر يسمح توسعها وتفتح الأبواب أمام العديد من التجارب لا يمكن تحقيقه في الجسم الحي، مثل حIGH اختبار الإنتاجية من العوامل التنظيمية الخلايا الجذعية المحتملة. هنا، نحن تصف ويبرهن على وجود طريقة موثوقة ومتسقة لخلايا الثقافة من CL شفوي من القاطعة الماوس.
واحدة من الخصائص الفريدة من الفقاريات هو تطور الأسنان. أصبح الأسنان نظام نموذجا هاما للمناطق عديدة من البحث، حيث تم التحقيق في المسارات الجزيئية والمورفولوجية التخصصات ذات الصلة لهذا الجهاز من عدة زوايا، بما في ذلك علماء البيولوجيا التطورية والتطورية 5. وفي الآونة الأخيرة، بدأ مجال الطب التجديدي للحصول على معلومات قيمة باستخدام الأسنان كنموذج. على وجه الخصوص، وقد تم اكتشاف الخلايا الجذعية الظهارية الأسنان تقدما هاما 6-13.
جميع القوارض تمتلك القواطع تزايد مستمر الذي يغذيه نمو الخلايا الجذعية، مما يجعل هذه الأسنان نظام نموذج الوصول إليها لدراسة تنظيم الخلايا الجذعية للبالغين. ، وقد أثبتت التجارب وضع العلامات في 1970s 10،11، تليها النسب الوراثية التجارب التي تتبع 8،9،12،14 DESCs يقيمون في المنطقة القريبة من القاطعة. جذعذرية خلية في مقصورة الظهارية على هذه الخطوة الجانب شفوي من مكانة المفترضة، والمعروفة باسم حلقة عنق الرحم شفوي (CL)، والمساهمة في السكان من الخلايا تسمى (TA) العبور تضخيم الخلايا (الشكل 1). على وجه التحديد، DESCs يقيمون في ظهارة الخارجي المينا (OEE) وشبكية النجمية (SR) 8،9،14، والمينا ظهارة الداخلية (IEE) يثير الخلايا TA التي تقدم من خلال عدد محدود من دورات الخلية ثم الخطوة بشكل أقصى طول طول القاطعة (الشكل 1). تواصل خلايا تكوين المينا التفريق في القاطعة الماوس للتحرك بشكل أقصى طول القاطعة بمعدل ملحوظ من حوالي 350 ميكرومتر في يوم واحد 15،16. لأنها تتحرك، فإن الخلايا تتمايز إلى خلايا تكوين المينا ناضجة والطبقة intermedium (SI) الخلايا. بعد إيداع كامل سماكة المينا المصفوفة، فإن العديد من خلايا تكوين المينا الخضوع لموت الخلايا المبرمج، والخلايا المتبقية في تقليص حجم وتنظيم نضوج المينا <سوب> 17. سلالة من أنواع الخلايا الأخرى في CL شفوي، مثل SR، هو أقل وضوحا، والبيانات المتعلقة الخلايا الجذعية في اللحمة المتوسطة 18 و CL في اللغات ليست سوى بداية في الظهور.
باستخدام نموذج القاطعة الماوس، عملت عدد من المجموعات لتوضيح مسارات الجينية والعمليات البيولوجية الخلايا الجذعية تشارك في تجديد الجهاز القائم على الخلايا الطبيعية. ومع ذلك، فإن CL شفوي يحتوي على عدد قليل نسبيا من الخلايا، تشير التقديرات إلى أن حوالي 5،000 في القاطعة الماوس، مما يجعل العمل مع الخلايا الأولية التحدي. لذلك، بذلت جهود للثقافة وتوسيع هذه الخلايا في المختبر 6،16،19،20 من أجل فتح أبواب جديدة للمناهج التجريبية التي ليست قابلة للتحقيق في الجسم الحي. وقد أظهرت الدراسة الأخيرة أن هذه الخلايا يمكن أن كلا تجديد الذات والتمايز إلى أميلوجينين معربا عن الخلايا عند مثقف 13. هنا، نحن تصف ويبرهن على وجود طريقة لالالبريد ثقافة موثوقة ومتسقة من الخلايا من شفوي الماوس CL.
كانت الخلايا الظهارية الأولى بنجاح مثقف 40 عاما مضت أكثر من 21-24، وفي الآونة الأخيرة، والعزلة الناجحة من الخلايا الجذعية الظهارية 25-27 وقد تقدمت معرفتنا البيولوجيا الظهارية. نفيدكم بروتوكول للعزل DESCs من القاطعة الماوس الكبار، يبلغ عدد سكانها سلوكه نسبيا من …
The authors have nothing to disclose.
المؤلفين أشكر شيوى بينغ وانغ للمساعدة أولية مع الثقافات DESC. تمول من الكتاب في جزء من المنح الدراسية والمنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (K99-DE022059 لAHJ، K12-GM081266 إلى MGC، K08-DE022377-02 لOH، وR01-DE021420 إلى ODK).
Forceps, size 5 | Fine Science Tools | 11251-30 | FST by Dumont, Dumoxel, |
Forceps Straight, fine, 3.5 | Roboz | RS5070 | |
Razorblades | Electron Microscopy Services | #71960 | |
Scalpel Handle No.3 | VWR | ||
Feather Blade No. 15 | Electron Microscopy Services | #72044-15 | Surgical Stainless Steel |
Collagenase Type-1 filtered | Worthington Biochemical Corporation | #4214 | |
Insulin syringe | BD | #329424 | |
Accumax | EMD Millipore | #SCR006 | |
DMEM/F12 | Gibco | 11320-033 | |
EGF | R&D | 2028-EG-200 | |
FGF2 | R&D | 233-FB-025 | |
B27 Supplement | Gibco | 10889-038 |