レーザー誘起ブレークダウン分光法：臓器組織内のナノ粒子のマッピングと定量化のための新たなアプローチ
Summary
薄い臓器や腫瘍組織で実行レーザー誘起ブレークダウン分光法は、成功したGd系ナノ粒子から発行された自然の要素と人工的に注入されたガドリニウム（Gd）を検出しました。化学元素の画像が100μmであり、定量的なサブミリ感度の解像度に達した。標準的な光学顕微鏡法を使用してセットアップの相溶性が同じ生物学的組織の複数の画像を提供するためのその可能性を強調している。
Abstract
レーザ誘起プラズマの発光分光法は、生体試料の元素分析に適用した。レーザ誘起ブレークダウン分光法（LIBS）げっ歯類組織の薄切片上で行わ：、腎臓および腫瘍例えば、（i）のNa、Ca、CuやMgの、P、及びFe等の無機元素の検出を可能にする、体内に自然に存在し（II）SiとGdが、ガドリニウム系ナノ粒子の注入後に検出。動物は、粒子の静脈内注射後1〜24時間後に安楽死させた。試料の二次元走査が、赤外レーザ光 が横解像度が100未満μmは表面を探索させ、電動マイクロメートル3Dステージを用いて行わ。臓器内部のGd元素の定量化学画像は、サブmMの感度が得られた。 LIBSは、特定のlabeliなしに無機材料の分布を研究するためのシンプルかつ堅牢な方法を提供していますNG。 、元素、分子、または細胞：さらに、標準的な光学顕微鏡法を使用してセットアップの適合性は、応答の異なる種類の同じ生物学的組織の複数の画像を提供するためのその可能性を強調している。
Introduction
生物学的用途のためのナノ粒子の広い開発は、生物学的サンプルでの定量化や画像化のための分析技術の並列改善を促した。通常、臓器中のナノ粒子の検出およびマッピングは、蛍光または共焦点顕微鏡法によって作製される。残念ながら、これらの方法は、特にその疎水性のために、非常に小さいナノ粒子、ナノ粒子の生体内分布を変更することができ、近赤外色素によるナノ粒子のラベル付けを必要とする。ラベルされたナノ粒子の検出、および特に非常に小さいナノ粒子（サイズ<10 nm）は、このように全身の規模ではなく、組織および細胞レベルでその生体内分布を妨害する可能性があります。任意のラベルなしでナノ粒子を検出することができ、新しいデバイスの開発は、彼らの行動や反応速度の研究のための新たな可能性を提供しています。さらに、脳内の鉄や銅などの微量元素の役割は、傷病アルツハイマー1、メンケス2,3、またはウィルソン4などのDの神経変性疾患は、組織におけるこれらの要素を研究し、ローカライズするために興味をお勧めします。
様々な技術が、異なる材料の元素マッピング又は微量分析を提供するために使用されてきた。 2006年に公開された彼らのレビュー論文では、R. Lobinski らは、生物学的環境、分析科学5のための最も挑戦的な環境の一つでの微量元素分析のために利用可能な標準的な技術の概要を説明しました。元素濃度が十分であれば、透過型電子顕微鏡におけるエネルギー分散型X線マイクロアナリシスから成り電子マイクロプローブが、多数の研究に適用することができる（> 100〜1,000μgの/ g）であった。検出下限に到達するために、以下の技術が使用されている。
- 用いたイオンビームマイクロ粒子励起X線発光μ-PIXE（1月10日μgの/ g）を6
- SYNchrotron放射微量分析μ-SXRF（0.1〜1μgの/ g）を7
- 二次イオン質量分析法（SIMS 0.1μgの/ g）を8
- （/ gの0.01μgのまで）レーザーアブレーション誘導結合質量分析、LA-ICP-MS 9,10
Lobinski らから抽出された表1に示すように、上記の技術は、マイクロメートル分解能を提供する。
シリアル2D調査の3次元再構成も深部組織11の再構築のために提案することができた。しかし、すべてのデバイスとシステムが両方の高い高価な機器への適度な有資格の専門家、および長期的な実験（μ-SXRF用×100〜100μmでとLA-ICP-MS用のX 10ミリメートル10ミリメートルのため、通常以上の4時間を必要とする）12。要するに、これらの要件は、微量元素分析が非常に制限し、従来の光学イメージングシステムとの互換性が確認蛍光顕微鏡や非線形顕微鏡。ここで言及することができますもう一つのポイントは、定量的な測定能力はまだかなり限られており、マトリックスマッチング実験室の規格の利用可能性に依存することである。さらに、業界プロセスにおける微量元素分析の利用の一般化、地質学、生物学、アプリケーションの他のドメインは、重要な概念や技術革新を生成します。
現在の原稿の目的は、従来の光学顕微鏡と完全な互換性を卓上計測機器との生物学的組織における定量元素マッピング（または微量元素分析）のためのソリューションを提案することである。我々のアプローチは、レーザー誘起ブレークダウン分光法（LIBS技術）に基づいています。 LIBSに、レーザーパルスは、材料の破壊や火花を作成するために、対象サンプルに焦点を当てています。血漿中に放出された原子放射線は、その後、分光計とエレメンによって解析されているTAL濃度は13,14予め行わ較正測定で取得できます。 LIBSの利点は、感度（μgの/ gで、ほぼすべての要素）、コンパクト、非常に基本的なサンプル調製、試料との接触がない場合、瞬時の応答と正確にローカライズされた（マイクロ）表面分析が含まれています。組織のレーザアブレーションは、微細に一緒μgの/ gの範囲15,16内の感度で高空間分解能でマッピングを行うように制御しなければならないので、組織化学的画像化の適用は困難なままである。
このようなソリューションでは、トレーサーまたは標識剤の付加は、生物学的組織におけるそれらのネイティブ環境で直接無機元素を検出することを可能にする、必要とされていません。我々の研究室で開発されたLIBS機器が可能に0.1 mMの16に相当35μgの/ g未満のGdの推定感度が100μmよりも劣っ現在の解像度を提供しています大規模なサンプルのマッピング（> 1 cm 2）を 30分以内。また、自家製のソフトウェアは、データの取得や活用を促進します。この器具は、（Gdの）マップを検出し、およびガドリニウムの組織分布を定量化するために使用される系ナノ粒子17 –小動物から腎臓および腫瘍サンプル18 1〜24時間の粒子の静脈内注射（サイズ<5 nm）の後に。例えば、鉄、カルシウム、ナトリウム、及びPのような本質的に、生体組織に含まれる無機元素は、、、も検出し、画像化されている。
Protocol
Representative Results
Discussion
生物学的サンプルに適用され、この技術は、異なる器官内に注射のGd系ナノ粒子からのGdとSiのマッピングと定量化、 すなわち 、化学イメージングを可能にする。主な重要な設定から、レーザ特性（波長、パルスエネルギー、フォーカス、および安定性）の制御が正確かつ細かい組織切除（ すなわちマッピング分解能）のためだけでなく、感度のために重要である。高エネルギ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者は感謝してLabex-Imustによって財政支援を認める。
Materials
| Laser nanosecond Nd:YAG | Quantel | Brillant | 5ns pulse witdh, wavelength 1064 nm |
| Spectrometer | Andor Technology | Shamrock 303 | with 1200 l/mm blazed at 300 nm grating |
| Detector ICCD | Andor Technology | Istar | 2 ns temporal resolution |
| LIBS Unit | ILM | Homemade Instrumentation | |
| Gd-based nanoparticles | Nano-H | particles | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H4034 | for particle's dilution |
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | 21108 | for particle's dilution |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S5886 | for particle's dilution |
| mice | Charles River | depending of animal breeding | |
| isoflurane | Coveto / Virbac | for anaesthesia – Isofluranum | |
| isopentane | Sigma-Aldrich | 59060 | to froze the sample slowly |
| liquide nitrogen | Air Liquide | to cool down the isopentane | |
| cryostat | Leica | CM-3050S | to slide the samples |
| petri dishes | Dutscher | 353004 | to stick the sample |
Riferimenti
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