Questo protocollo descrive registrazione extracellulare delle possibili azioni di risposta sparati dai neuroni del gusto labellar in Drosophila.
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Articolo metodologico
Elettrofisiologici Registrazione da
In questo articolo
Sommario
Abstract
La risposta gusto periferico degli insetti può essere potentemente indagato con tecniche elettrofisiologiche. Il metodo qui descritto consente al ricercatore di misurare le risposte gustative direttamente e quantitativamente, riflettendo l'input sensoriale che il sistema nervoso dell'insetto riceve da stimoli di sapore nel suo ambiente. Questo protocollo descrive tutti i passaggi chiave nello svolgimento di questa tecnica. I passaggi critici nel montaggio di un impianto di elettrofisiologia, come la scelta delle attrezzature necessarie e di un ambiente adatto per la registrazione, sono delineati. Abbiamo anche descritto come prepararsi per la registrazione facendo opportuni elettrodi di riferimento e di registrazione, e le soluzioni sapida. Descriviamo in dettaglio il metodo per preparare l'insetto mediante inserimento di un elettrodo di riferimento in vetro al volo per immobilizzare proboscide. Noi mostriamo tracce di impulsi elettrici sparati da neuroni gusto in risposta ad uno zucchero e un composto amaro. Aspetti del protocollo sono tecnicamente impegnativo e includiamo una descrizione dettagliata di alcune sfide tecniche comuni che si possono incontrare, come la mancanza di segnale o rumore eccessivo nel sistema, e le possibili soluzioni. La tecnica ha limitazioni, come l'incapacità di fornire stimoli temporalmente complessi, osservare sfondo cottura immediatamente prima stimolo consegna o usare i composti gusto insolubili in acqua convenientemente. Nonostante questi limiti, questa tecnica (comprese variazioni minori si fa riferimento nel protocollo) è uno standard, procedura ampiamente accettato per la registrazione di risposte neuronali Drosophila al gusto composti.
Introduzione
Il senso del gusto permette un insetto per rilevare una vasta gamma di prodotti chimici solubili e svolge un ruolo importante nella accettazione di una sostanza nutriente, o il rifiuto di uno nocivi o tossici. Gusto è anche pensato di svolgere un ruolo nella selezione del partner, attraverso il rilevamento di feromoni 1-5. Queste funzioni importanti e diverse hanno reso il sistema del gusto insetto bersaglio irresistibile di indagine come i sistemi sensoriali traducono stimoli ambientali in output comportamentali rilevanti.
L'unità principale del sistema di gusto Drosophila melanogaster sono i capelli gusto, o sens....
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Protocollo
Il seguente protocollo è conforme a tutte le direttive cura degli animali della Yale University.
1. Reagenti agricole per la preparazione
- Registrazione installazione attrezzature (Figura 1A).
- Scegliere una sala per l'installazione impianto che è libero di ampie variazioni di temperatura o umidità e anche isolata da fonti di rumore elettrico e meccanico, come i frigoriferi e centrifughe.
- Scegliere una sala per l'installazione impianto che è libero di ampie variazioni di temperatura o umidità e anche isolata da fonti di rumore elettrico e meccanico, come i frigoriferi e centrifughe.
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Risultati
Figura 5A mostra la risposta di una L sensillum ad uno zucchero, saccarosio. Lo stesso sensillum non risponde ad un composto amaro, berberina. Figura 5B mostra che un tipo I sensillum, che contiene un neurone reattivo amaro, visualizza maggiori picchi di ampiezza in risposta alla berberina, e picchi di ampiezza più piccoli in risposta al saccarosio. L sensilla visualizzare una minima risposta di fondo al controllo solvente, TCC, mentre sensilla visualizzo praticamente alcuna risposta al.......
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Discussione
Sensilla Labellar variano nella facilità della registrazione a causa delle differenze nella morfologia e l'organizzazione anatomica. A volte un sensillum non risponde ad alcuna tastants, anche uno che è noto per suscitare una risposta positiva. La frequenza con cui ciò si verifica varia a seconda del tipo di sensillum. L sensilla sono più costantemente reattivo e sono relativamente facili da accedere a causa della loro lunghezza. In generale, S sensilli sono sempre reattivo, ma la loro corta lunghezza e la posizione.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da un predoctoral 1F31DC012985 sovvenzione NRSA (a RD) e da sovvenzioni NIH per JC
Vorremmo ringraziare il Dott. Linnea Weiss per gli utili commenti sul manoscritto, il dottor Ryan Joseph di aiuto per la compilazione figure, e il dottor Frederic Marion-Poll per utili consigli tecnici. Vorremmo inoltre ringraziare gli utili commenti di quattro utenti.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microscopio stereo zoom | Olympus | SZX12 DFPLFL1,6x PF oculari: WHN10x-H/22 | in grado di ingrandimento ~150X con supporto da tavolo a lunga distanza di lavoro |
| Sistemi cinetici | da tavolo antivibranti | Micromanipolatori BenchMate2210 | |
| Narishige | NMN-21 | ||
| Supporti magnetici | ENCO | Modello #625-0930 | |
| Riferimento Porta elettrodo | Harvard Apparatus | ESP/W-F10N | Può essere montato su pipetta sierologica da 5 ml per una gamma estesa |
| Silver Wire | World Precision Instruments | AGW1510 | 0,3-0,5 mm di diametro |
| storta generico | |||
| Tubo | di uscita generico, diametro 1 cm | ||
| Tubo flessibile in plastica | Nalgene | 8000-0060 | VI grado 1/4 di diametro interno |
| conico da 500 ml | generico, con braccio laterale | ||
| Pompa per acquario | Giardini acquatici | Pompa ad aria 2000 | |
| Sorgente luminosa in fibra ottica | Dolan-Jenner | Industries Fiber-Lite 2100 | |
| White Card/Paper | Whatman | 1001-110 | |
| Sistema di acquisizione digitale | Syntech | IDAC-4 | Alternativa: National Instruments NI-6251 |
| Headstage | Syntech | DTP-1 | Tasteprobe Tasteprobe |
| Amplifier | Syntech | DTP-1 | Tasteprobe |
| Clip a coccodrillo | Grainger | 1XWN7 | Qualsiasi marca va bene |
| Cavo | |||
| Connettore in oro generico Pin World | Precision Instruments | 5482 | |
| Personal Computer | Dell | Vostro | Verifica la compatibilità con il sistema di acquisizione digitale e il software |
| Software di acquisizione Syntech | Autospike | Autospike funziona con IDAC-4; in alternativa, utilizzare LabView con NI-6251 | |
| Foglio di alluminio e/o gabbia | Schermatura dal rumore elettromagnetico Capillari | ||
| vetro borosilicato | Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Estrattore per pipette | Sutter Instrument Company | Modello P-87 Estrattore per micropipette fiammeggiante/marrone | |
| Sigma | T0252-100G | ||
| Stereomicroscopio | Olympus | VMZ 1x-4x | in grado di ingrandire 10-40X |
| Secchiello | Punte | ||
| pipette generiche p200 | |||
| Ago spinale | Terumo | SN * 2590 | |
| Siringa da 1 ml | Beckton-Dickenson | ||
| Assemblato da puntali per pipette P1000, tubi di plastica flessibili e rete | |||
| Modellazione Clay | |||
| Generic Pincipe | Fine Science Tools By Dumont | 11252-00 | #5SF (punte super-fini) |
| Siringa da 10 ml | Beckton-Dickinson | 301029 | |
| Tubo in plastica | Tygon | R-3603 |
Riferimenti
- Glendinning, J. I., Jerud, A., Reinherz, A. T. The hungry caterpillar: an analysis of how carbohydrates stimulate feeding in Manduca sexta. The Journal of experimental biology. 210, 3054-3067 (2007).
- Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. Common sense....
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Ristampe e permessi
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