임신 중 쥐의 간 조직에서 지방산의 작곡 변화를 분석하는 가스 크로마토 그래피의 사용
Summary
임신 산모 조직의 지방산 조성에 상당한 변화를 이끈다. 지질 쥐 사이의 식별 및 개별 지질 클래스에있는 지방산의 정량 임신 중에 다양한 높고 낮은 지방 다이어트를 공급 할 수 있도록 가스 크로마토 그래피를 통해 얻을 수있다.
Abstract
기체 크로마토 그래피 (GC)은 높은 정확도 및 재현성 결과를 수득 조직, 세포 및 혈장 / 혈청에서 지질의 지방산 콘텐츠를 식별하고 정량화하기 위해 사용되는 매우 중요한 방법이다. 대사 및 영양 연구에서 GC는 허용 개입을 다음과 지방산 농도 또는 임신 등의 생리적 상태의 변화시 변화의 평가. 아미노 실리카 카트리지를 사용하여 고체상 추출 (SPE)가 허용 트리 아실 글리세롤, 다른 인지질 및 콜레 스테 릴 에스테르 (CE)를 포함한 주요 지질 클래스의 분리. SPE와 함께 GC 다양한 높고 낮은 지방 다이어트를 공급했다 처녀 임신 한 쥐의 간에서 CE 분획의 지방산 조성의 변화를 분석하는 데 사용되었다. 간 CE의 오메가 -3와 오메가 -6 지방산 함량에 따라 상당한 다이어트 / 임신 상호 작용 효과는 임신 한 여성은식이 manipulat에 다른 반응을 나타내는 있습니다보다 이온 처녀 여성 사이에서 볼 수있다.
Introduction
기체 크로마토 그래피 (GC)의 보급이나 생리적 비만과 같은 조건 (및 당뇨병과 같은 관련 질환) 또는 임신 3 중에 지질 풀 및 세포막 1,2으로 지방산의 혼입을 식별하고 정량화하기 위해 사용 노포 기법 – 5. 또한 식품의 유형과 지방의 양을 분석에 적합하다. 실험 사료의 특성뿐만 아니라, 식품 업계가 규정을 준수 함을 보장하는 경우에 유용합니다. 예를 들어, GC는 라벨링가 정확하고 규제가 6,7에 부착되도록하는 등 건강 보조 식품 등의 제품 내의 아이덴티티 및 지방산의 양을 확인하기 위하여 사용될 수있다. 지방산의 분석은 질병과 건강식이 변화의 영향 및 생리적 상태 8의 변동 효과 지질 대사에 가치있는 통찰을 제공 할 수있다. 임신 중에 샘플을 연구하는 GC의 사용은 중요한 제공하고 있습니다지방산과 복합 지질 항상성 3의 변화에 대한 정보를 제공합니다.
크로마토 그래피 분리에 앞서, 지질은 일반적 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매에서의 지질 용해도를 사용하여 샘플로부터 추출된다. 염화나트륨 9,10 단계를 포함하는 수성 및 유기 지방질로 혼합물의 분리를 용이하게하기 위해 첨가된다. 그 복잡한 지질 클래스는 고체상 추출 (SPE)에 의해 총 지질 추출물로부터 분리 될 수있다. 이 분리 기술은 극성 또는 결합 친화도에 따라 지질 클래스를 용출. Triacyglycerols (TAG) 및 콜레 스테 릴 에스테르 (CE)가 결합 분획, 상기 클래스, 포스파티딜콜린 (PC)와 같은 제 용출, 포스파티딜 에탄올 아민 (PE), 비 에스테르 화 지방산 (NEFA)은 용출 용매의 극성을 증가시킴으로써 용출 . CE에서 TAG의 분리는 신선한 SPE의 cartri에 태그의 결합을 이용DGE, CE가 용출 될 수 있도록. TAG는 용출 용매 9,10의 극성을 증가시킴으로써 용출 될 수있다. 이 방법은보다 높은 수율로 동시에 분리 될 여러 샘플들이 비교적 작은 크기의 샘플 (예를 들어 <100 μl의 혈장 또는 혈청, <100 밀리그램 티슈) (11, 12)를 분석 할 수 있음을 의미하는, 박막 크로마토 그래피로 달성한다.
GC는 제 1950에 기재된 잘 확립 된 기술이며, 이는 다음 액체 – 액체 시스템에서의 이동상이 증기로 대체 될 수 있다고 제안 하였다. 그것은 초기 석유 분석에 사용하지만 급속 같은 아미노산 분석 및 주요 관심 여전히 지질 생화학 같은 다른 영역으로 확장되었다. 이러한 이전에 사용 된 포장 열에서 모세관 컬럼의 개발과 같은 GC 장비 및 기술의 발전은 지방산이 될 수있는 우리의 현재 기술을 주도하고있다GC 일상적 조사 (13)의 넓은 범위에서 지방산을 식별하고 정량화하기 위해 사용되는 결과로 낮은 온도에서 더 효율적으로 분리된다.
GC들은 열분해없이 알맞은 온도에서 용출 될 정도로 충분히 휘발성이 될 수 있도록 유도되는 지방산을 필요로한다. 이것은 보통 분석 에스테르, 티오 에스테르 또는 아미드를 형성하는 수소 함유 작용기의 치환을 포함한다. 메틸 에스테르는 일반적으로 메틸화에 의해 생성되는 파생 상품을 연구한다. 이 방법에서는 복합 지질의 에스테르 결합은 지방산 메틸 에스테르 (FAME)을 형성 transmethylated되는 유리 지방산을 방출하는 가수 분해된다. GC에 의해 결정 FAME의 결과 프로파일은, 지방산 조성이라고 쉽게 다른 실험군 9,10 사이에 비교 될 수있다. 기술은 허용 individ의 비율 모두연간 지방산과 그 농도를 측정한다.
영양 연구 및 식품 산업 내의 지방산 분석을위한 GC의 용도 이외에, 분석적 기술은 폭 넓은 분야에서 사용할 수있다. 예를 들어, GC를 이용하여, 환경 분석은 살충제 및 토양에서 수질 오염을 측정 포함하는 클로로 벤젠 함량을 측정 분석한다. 독물학에서 GC 또한 소변 및 개인의 혈액 샘플에서 불법 물질을 식별하기 위해 사용 된, 예컨대 스포츠 퍼포먼스 강화제 (12)와 탄화수소의 복잡한 혼합물을 분리하는 능력은 화학 분석 (12)에 대한 석유 산업에서이 기술은 대중 만든다.
임신 구체적 오메가 -3 법적 산모 조직의 지방산 조성에 상당한 변화, (N-3) 및 오메가 -6 (N-6) 고도 불포화 지방산 ACI와 연결된DS (PUFA) 3. 현재 연구에서, 우리는 다른 오일 소스와 낮은 고지방식이를 공급 처녀 임신 랫트로부터 취한 간 조직의 지방산 조성의 분석에서의 사용을 설명하는 순서 지방산의 측정에서 GC를 사용하는 방법을 예시. 여기에 제공된 실험 다이어트는 저지방 콩기름 식단, 고지방 대두유 기반의 다이어트 (130.9 g 총 지방 / kg 총 지방) 또는 높은 지방 아마씨 기름 기반의 다이어트 (130.9 g 총 지방 / kg이었다 20 일에 대한 가격을 제공하는 다이어트). 이러한 다이어트의 전체 영양 및 지방산 조성은 이전에 14 설명 하였다. 콩기름 다이어트는 리놀레산 (18시 2분 N-6)이 풍부하고, 아마씨 기름 다이어트 α-리놀렌산이 풍부 동안 일부 α-리놀렌산 (18시 3분 N-3)가 포함되어 있습니다. 이러한 높은 지방 다이어트는 리놀레산 α-리놀렌산하는 산 (각각 8:1 1:1의 배급)의 다른 식량을 나타냅니다. 개인 지질 클래스와 GC에 의한 분석의 분리를위한 방법은 우리입니다LL 설립 및 검증, 이전에 10 만, 여기에있는 자세한 기술 설명없이 게시되었습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
기체 크로마토 그래피는 지방산 분석을 위해 사용하는 정확한 방법이며, 그 재현성이 높은 임상 분석에 적합한이 기술을 판단. 적절한 GC 컬럼은 가능한 열 정지상, 컬럼 길이 및 내경의 극성의 변화를 갖는, 또한 지방산의 식별을 가능하게하기 위해 사용되어야한다. 분석 방법에있어서 용융 실리카 모세관 컬럼의 사용은 우수한 열 안정성과 높은 표면 불활성 양호한 해상도 8에 의한 유지…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 쥐를 대상으로 한 연구에 Meritxell 로미오 – 나달의 기여를 인정하고 싶습니다.
Materials
| Methanol: | Fisher Scientific | M/4056/17 | 'CAUTION' Fumes – HPLC Grade |
| Chloroform: | Fisher Scientific | C/4966/17 | 'CAUTION' Fumes – HPLC Grade |
| BHT: | Sigma- Aldrich | W218405 | 'CAUTION' Dust fumes – Anhydrous |
| NaCl | Sigma- Aldrich | S9888 | Anhydrous |
| Hexane | Fisher Scientific | H/0406/17 | 'CAUTION' Fumes – HPLC Grade |
| Glacial acetic acid | Sigma- Aldrich | 695084 | 'CAUTION' Burns – 99.85% |
| Sulfuric acid | Sigma- Aldrich | 339741 | 'CAUTION' Burns – 99.999% |
| Potassium carbonate | Sigma- Aldrich | 209619 | 99% ACS Reagent grade |
| Potassium bicarbonate | Sigma- Aldrich | 237205 | 99.7% ACS Reasgent grade |
| Ethyl acetate | Fisher Scientific | 10204340 | 'CAUTION' Fumes – 99+% GLC SpeciFied |
| Toluene | Fisher Scientific | T/2300/15 | 'CAUTION' Fumes |
| Diethyl ether | Sigma- Aldrich | 309966 | 'CAUTION' Fumes |
| Nitrogen (oxygen free) cylinder | BOC | 44-w | 'CAUTION' Compressed gas – explosion risk |
| Aminopropyl silica SPE cartridges | Agilent | 12102014 | Cartridge – Bead mass 100mg |
| Silica gel SPE cartidges | Agilent | 14102010 | Cartridge – Bead mass 100mg |
| Molecular seives | Sigma- Aldrich | 334324 | Pellets, AW-300, 1.6mm |
| Glass pasteur pipettes | Fisher Scientific | FB50251 | |
| Borosilicate glass test tube | Fisher Scientific | FB59527 | Non-screw cap |
| Screw thread glass test tubes | Fisher Scientific | FB59555 | 13mm |
| Caps for screw thread test tubes | Fisher Scientific | FB51353 | To fit 13mm tube |
| Solida phase extraction (SPE) tank | Agilent | VacElut 20 Manifold | |
| Luer stopcocks for SPE tank | Agilent | 12131005 | |
| Vacuum pump | Sigma- Aldrich | 2656-194GB-1EA | |
| GC vials | Kinesis | STV 12-03TS | Short thread 9mm, TPX 0.2ml fused glass insert |
| GC vial lids | Kinesis | SCC09-0.2B | Short thread 9mm blue |
| GC inlet liners | SGE Analytical science | 092002 | Split/splitless Focus liner ID 4mm, OD 6.3mm length 78.5mm |
| GC septa | SGE Analytical science | 041856 | 11mm, MN material |
| GC column | SGE Analytical science | 054612 | Length 30m, ID 0.22mm, Film thickness 0.25µm |
| Gas chromatograph | HP 6890 series |
Riferimenti
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