A Modified<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion test per determinare il ruolo potenziale di ormoni, citochine e / o fattori di crescita nella mediazione Cancer Invasion cellulare

Sommario

Questo articolo video descrive un metodo in vitro modificato per esaminare il ruolo di ormoni, citochine e/o fattori di crescita nel guidare l'invasione delle cellule tumorali.

Abstract

Siero del sangue funge da chemoattractant verso il quale le cellule tumorali migrano e invadono, facilitando il loro intravasation in microvasi. Tuttavia, le molecole reali verso cui le cellule migrano rimangono sfuggente. Questo test invasione modificato è stato sviluppato per identificare gli obiettivi che guidano la migrazione delle cellule e l'invasione. Questa tecnica confronta l'indice invasione in tre condizioni per determinare se un ormone specifico, fattore di crescita, citochine o gioca un ruolo nel mediare il potenziale invasivo di una cellula tumorale. Queste condizioni includono i) normale siero fetale bovino (FBS), ii), carbone-spogliato FBS (CS-FBS), che rimuove gli ormoni, fattori di crescita e citochine e iii) CS-FBS + molecola (denotato "X"). Un cambiamento significativo nella invasione delle cellule con CS-FBS rispetto al FBS, indica il coinvolgimento di ormoni, citochine e fattori di crescita nel mediare il cambiamento. Molecole individuali possono essere aggiunti nuovamente al CS-FBS per saggiare la capacità di riversetto o salvare il fenotipo invasione. Inoltre, due o più fattori possono essere combinati per valutare la effetti additivi o sinergici di più molecole in guida o inibire l'invasione. In generale, questo metodo consente al ricercatore di determinare se ormoni, citochine e / o fattori di crescita svolgono un ruolo nella invasione delle cellule servendo come fattori chemiotattici o inibitori di invasione per un particolare tipo di cellula tumorale o un mutante specifica. Identificando chemioattrattanti e inibitori specifici, questo test invasione modificato può aiutare a chiarire vie di segnalazione che dirigono l'invasione delle cellule tumorali.

Introduzione

Un test invasione romanzo è stato sviluppato con l'obiettivo di individuare il coinvolgimento di specifici ormoni, citochine e / o fattori di crescita come fattori chemiotattici di invasione delle cellule del cancro. La capacità delle cellule tumorali di invadere attraverso la matrice extracellulare (ECM) è una caratteristica del fenotipo metastatico ^1-3. Camere Invasion sono stati ampiamente utilizzati come strumenti in vitro per studiare l'invasione delle cellule tumorali e la migrazione e possono fornire conoscenze ai meccanismi di in vivo invasione tumorale e metastasi. Le camere sono costituiti da inserti di coltur....

Protocollo

1. Preparare i supporti differenti e componenti aggiuntivi

1. Prima di sperimentare, preparare supporti costituito da DMEM o altri supporti specificati con l'aggiunta di una normale FBS, carbone spogliato FBS, o carbone spogliato FBS più il componente da testare. Si noti che più componenti possono essere testati in ogni esperimento.
2. Pesare e diluire gli ormoni, fattori di crescita, citochine o opportunamente essere disciolti nel siero carbone spogliato alla concentrazione fisiologica.

2. Preparare il collagene Matrix on Ice

1. Preparare 2 ml di collagene I matrice a 2,2 mg / ml aggiungendo i seguenti co....

Risultati

L'indice di invasione viene calcolato per ogni condizione secondo la normalizzazione di una linea cellulare non invasivo. Per i nostri esperimenti, utilizziamo la linea cellulare di melanoma 1205Lu e linee cellulari stabili varianti affermata come nostre linee invasive nonché la variante non invasivo premaligne, WM793 da cui le cellule sono state derivate 1205Lu ¹⁰ che serve da controllo logica. Utilizziamo anche il collagene I come la matrice invasione perché è la componente primaria del derma. Ciò è in .......

Discussione

Metastasi tumorali è un processo a più fasi. Le cellule devono attraversare la membrana basale, intravasate in nessuna delle due il sistema linfatico o di sangue microvasi, in cui sono trasportati in siti distanti. Le cellule tumorali quindi stravaso e colonizzano in un macrometastasis ^12. La progressione attraverso l'epitelio di transizione mesenchimale (EMT), invasione tumorale, e metastasi è stato migliorato dagli ormoni steroidei ^13,14, fattori di crescita ^15-18, e ^19-21

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Inserti di controllo BioCoat con 8.0 µ m Membrana in PET	Corning	354578	12 in ciascuna delle due piastre da 24 pozzetti. PET = polietilene teraftalato
Collagene I, coda di ratto	Corning	354236	Fonte = tendine della coda di topo, purezza = 90%
Fissativo; Diff-Quick	Thermo Fisher Scientific	NC9844047	Fissativo a base di metanolo, ematossilina/eosina
Siero fetale bovino	Life Technologies	16000	Designato come FBS
Siero fetale bovino spogliato al carbone	Life Technologies	12676	Designato come CS-FBS
Siero fetale bovino	Thermo Scientific Hyclone	SH30070	Designato come FBS
Siero fetale bovino spogliato al carbone	Thermo Scientific Hyclone	SH30068	designato come CS-FBS