सागर प्रकार की मछली में लिवर कायापलट के दौरान बिलियरी अध: पतन कल्पना के लिए एक नया स्पष्टीकरण विधि ( Petromyzon Marinus)
Summary
सागर एक प्रकार की मछली कायापलट दौरान पित्ताशय और पित्त नलिकाएं, मानव पित्त अविवरता लिए इसी तरह की एक प्रक्रिया खो देते हैं. एक नए निर्धारण और स्पष्टीकरण विधि (स्पष्टता) लेजर स्कैनिंग confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग पूरे पित्त पेड़ कल्पना करने के लिए संशोधित किया गया था. इस विधि पित्त अध: पतन का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है.
Abstract
पित्त अविवरता ताइवान में 5000 में 1 की एक रिपोर्ट आवृत्ति के साथ एक अनुमान के अनुसार 1 15,000 में दक्षिण पूर्व संयुक्त राज्य अमेरिका में आवृत्ति, लेकिन पूर्वी एशियाई देशों में आम है, के साथ बचपन की एक दुर्लभ बीमारी है. ज्यादा पित्त अविवरता के प्रबंधन के बारे में जाना जाता है, अपनी रोगजनन अभी भी मायावी है. समुद्र एक प्रकार की मछली (Petromyzon Marinus) पित्त अध: पतन की व्यवस्था है और प्रगति की जांच के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है. लार्वा, परजीवी, और वयस्क: सागर एक प्रकार की मछली तीन अलग जीवन चरणों के माध्यम से विकसित करना. लार्वा से परजीवी किशोर के संक्रमण के दौरान, समुद्र एक प्रकार की मछली बाहरी आकारिकी और आंतरिक अंगों में नाटकीय पुनर्गठन और remodeling के साथ कायापलट गुजरना. जिगर में, पूरे पित्त प्रणाली पित्ताशय और पित्त पेड़ सहित, खो दिया है. "स्पष्टता" नामक एक नव विकसित विधि रूपांतरित समुद्र एक प्रकार की मछली में आंत के साथ पूरे जिगर और जंक्शन स्पष्ट करने के लिए संशोधित किया गया था.पित्त अध: पतन की प्रक्रिया लेजर स्कैनिंग confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कल्पना और समुद्र एक प्रकार की मछली कायापलट दौरान discerned किया गया था. इस पद्धति का एक अनूठा पशु मॉडल में पित्त अविवरता अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है.
Introduction
सागर एक प्रकार की मछली तीन अलग जीवन के माध्यम से विकसित 1,2 चरणों. लार्वा समुद्र एक प्रकार की मछली (एल) benthic फिल्टर भक्षण के रूप में बिलों में सबसे अधिक समय खर्च करते हैं. बाहरी आकारिकी और आंतरिक अंगों 3 में पुनर्गठन में नाटकीय परिवर्तन के सात रूपांतरित चरणों से गुजरने के बाद, जिसके परिणामस्वरूप किशोरों (जेवी) बड़े पैमाने पर 100 से अधिक बार शरीर में वृद्धि, वे मेजबान मछली से रक्त और ऊतकों के तरल पदार्थ को खाते हैं, जिसके दौरान एक परजीवी चरण में प्रवेश . सागर या बड़ी झीलों में मेजबान मछली पर खिला 1.0-1.5 वर्षों के बाद, वयस्कों जल्दी वसंत ऋतु के दौरान खिला संघर्ष और अंडे के लिए नदियों में विस्थापित और फिर 1,2 मर जाते हैं.
कायापलट के दौरान, समुद्र एक प्रकार की मछली जिगर पित्ताशय और पूरे पित्त पेड़, मानव शिशु रोग पित्त अविवरता mimics कि एक विकासवादी उत्परिवर्ती phenotype खो देता है. शिशु पित्त अविवरता 4,5,6,7 गंभीर चिकित्सा जटिलताओं के साथ एक दुर्लभ बाल चिकित्सा जिगर की बीमारी है, 8,9,10, हालांकि पित्त अविवरता के रोगजनन और एटियलजि 4 काफी हद तक अनजान हैं. शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप (Kasai प्रक्रिया) 5 किया जाता है जब तक कि पित्त अविवरता के साथ मरीजों को जन्म के बाद दो साल के भीतर मर जाते हैं. बाद में, इन रोगियों व्यापक नैदानिक प्रबंधन और अक्सर यकृत प्रत्यारोपण 6 की आवश्यकता होती है. पित्त अविवरता etiopathogenesis के कई सिद्धांतों ऐसे वायरल संक्रमण, जन्मजात विकृति, autoimmune रोग, और विषाक्त अपमान के रूप में प्रस्तावित किया गया है. हालांकि, पित्त अविवरता के विकास के लिए प्रत्येक का योगदान 7,8,9,10 अधूरी बनी हुई है.
रोग पित्त अविवरता भुगतना कि शिशुओं के विपरीत, समुद्र एक प्रकार की मछली developmentally व्यापक necroinflammation, फाइब्रोसिस या सिरोसिस 10 बिना पित्त अविवरता क्रमादेशित गुजरना. पशु इस प्रक्रिया 10 के दौरान क्षणिक पित्तस्थिरता पीड़ित है, लेकिन इस विकास के हालत के लिए अनुकूल हो सकता हैके माध्यम से नए सिरे से संश्लेषण और जिगर 11 में पित्त नमक संश्लेषण की कमी के रूप में जाना जाता तंत्र के अलावा विकास पित्त अविवरता, के बाद आंत में पित्त लवण का स्राव. समुद्र एक प्रकार की मछली में इस विकास प्रक्रिया पित्त अविवरता की प्रगति की जांच के लिए ही जाना जाता अवसर प्रदान करता है.
"स्पष्टता" नामक एक नव विकसित विधि एक ऑप्टिकली पारदर्शी nanoporous हाइड्रोजेल 12 में बरकरार ऊतक बदलने से जटिल स्तनधारी नर्वस सिस्टम में उच्च संकल्प इमेजिंग में सक्षम बनाता है. समुद्र एक प्रकार की मछली जिगर और एक संशोधित स्पष्टता प्रोटोकॉल का प्रयोग, पित्त अध: पतन का बरकरार ऊतक इमेजिंग जिगर कायापलट भर में प्रलेखित किया जा सकता है.
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल एक nanoporous हाइड्रोजेल के लिए फार्म polyacrylamide साथ बरकरार ऊतक crosslinks, और फिर ऑप्टिकल पारदर्शिता और macromolecular पारगम्यता प्राप्त करने के लिए ऊतक के प्लाज्मा झिल्ली दूर स्ट्रिप्स जो "" स्पष्टता 12 नामक…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों हैमंड बे जैविक स्टेशन, ग्रेट झील विज्ञान केंद्र, अमेरिकी भूवैज्ञानिक सर्वेक्षण के योगदान को स्वीकार करते हैं. हम भी लेजर स्कैनिंग confocal माइक्रोस्कोपी में उसे तकनीकी समर्थन के लिए मिशिगन स्टेट यूनिवर्सिटी में विकसित माइक्रोस्कोपी के लिए केंद्र में डॉ. मेलिंडा फ़्रेम धन्यवाद. इस अध्ययन YWCD और WML को ग्रेट झील मत्स्य आयोग से अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| 40% acrylamide | Bio-Rad | 161-0140 | |
| 2% bis-acrylamide | Bio-Rad | 161-0142 | |
| TEMED | Bio-Rad | 161-0800 | |
| ammonium persulfate | Sigma | A3678-25G | |
| boric acid | Sigma | B7901-1KG | |
| saponin | Sigma | 47036 | |
| sodium dodecyl sulfate | Sigma | L337-500G | |
| sodium phosphate (monobasic) | Sigma | 04269-1KG | |
| sodium phosphate (dibasic) | Sigma | S5136-1KG | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-500ML | |
| glycerol | Sigma | G9012-500ML | |
| 16% paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15710-S | |
| NaOH pellets | EMD | SX0590-3 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Any brand | ||
| dissecting tools | Any brand |
Riferimenti
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