L'applicazione di desorbimento laser assistita da matrice tempo / ionizzazione di volo (MALDI-TOF) spettrometria di massa (MS) direttamente emocoltura brodo velocizza l'identificazione dei batteri. Il metodo proposto è un metodo rapido e affidabile per l'identificazione dei batteri Gram negativi direttamente dalla cultura sangue brodo.
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Articolo metodologico
Rapida identificazione dei batteri Gram-negativi dal sangue brodo di coltura Uso MALDI-TOF
In questo articolo
Sommario
Abstract
Un ruolo importante del laboratorio di microbiologia clinica è quello di fornire una rapida identificazione dei batteri che causano infezioni flusso sanguigno. L'identificazione tradizionale richiede la sub-cultura del segnalato brodo di coltura di sangue con l'identificazione disponibili solo dopo colonie su agar solido hanno maturato. MALDI-TOF MS è un metodo rapido affidabile per l'identificazione della maggioranza dei batteri clinicamente rilevanti quando applicato colonie su supporti solidi. L'applicazione di MALDI-TOF MS direttamente alla cultura del sangue brodo è un approccio interessante in quanto ha il potenziale di accelerare l'identificazione delle specie di batteri e migliorare la gestione clinica. Tuttavia, un problema importante da superare è la rimozione pre-analisi di interferenti resine, proteine e di emoglobina contenute nei campioni di sangue di cultura che, se non rimosso, interferiscono con la MS spettri e può portare a punteggi di identificazione discriminazione insufficienti o bassi. Inoltre è necessario concentrare Bacteria per sviluppare spettri di qualità sufficiente. Il metodo presentato descrive la concentrazione, la purificazione e l'estrazione dei batteri Gram-negativi che consentano l'identificazione precoce dei batteri da un segnalata cultura sangue brodo.
Introduzione
I pazienti con infezione sangue (BSI) a causa di batteri continuano ad avere alta mortalità in ospedale, che vanno 6-48% 1. La consegna di un adeguato antibiotica empirica promuove la sopravvivenza e nel sottogruppo di pazienti con sepsi grave, ogni ora di ritardo alla terapia appropriata è correlato alla diminuzione della sopravvivenza 2,3. Di conseguenza, un obiettivo chiave del laboratorio clinico è quello di rilevare rapidamente, identificare e comunicare la presenza di batteri nelle colture di sangue per informare le decisioni cliniche. È stato dimostrato che il laboratorio microbiologia ha la più grande influenza sulla terapia antimicrobic....
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Protocollo
1. Sangue Cultura Brodi Segnala come "Positive"
- Rimuovere il flacone cultura sangue segnalata dal cabinet monitoraggio incubazione continuo e posizionarlo in una cappa di sicurezza biologica. Nota: Le bottiglie possono contenere microrganismi pericolosi e precauzioni universali devono essere seguite. A causa del rischio di aerosol infettivi di campionamento, tutte le procedure di campionamento devono essere eseguite in una cappa a flusso laminare sicurezza biologica di classe II.
2. Gram Stain è preparato
- Preparare una colorazione di Gram dal segnalata brodo di coltura del sangue come da protocolli istitu....
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Risultati
Il generata MALDI-TOF MS spettri vengono confrontati con il database di riferimento integrato di spettri. Un punteggio logaritmica viene assegnato per la fiducia del match tra l'isolato di prova e il database di riferimento isolati, con la raccomandazione di un punteggio ≥ 1.7 richiesto per probabile identificazione a livello di generi (figura 1) e ≥ 2.0 per probabile l'identificazione di specie (Figura 2). Relazione al livello di specie quando il punteggio ≥ 1.7 e le prime 5 id.......
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Discussione
E 'importante quando si applica MALDI-TOF MS alla cultura del sangue brodo che le operazioni di post centrifugazione vengono eseguite con sufficiente attenzione a non rimescolare i componenti separati. È particolarmente importante rimuovere i componenti di coltura sangue e proteine cellulari umani, compresi emoglobina, che possono produrre picchi interferenti con gli spettri MALDI-TOF.
Anche se MS produce consiglia di tagliare punteggio ≥ 2.0 per le specie e ≥ 1.7 per l'identificaz.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| BACTEC Plus Aerobico/F Medio | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 442192 | |
| BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, Stati Uniti | 442265 | |
| BACTEC Peds Plus Medium | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, Stati Uniti | 442194 | |
| Vacutainer - Dispositivo per il trasferimento del sangue | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 364880 | Dispositivo di campionamento monouso che riduce il rischio di lesioni da aghi |
| Vacutainer SST 5,0 ml, Advance plus | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 367954 | Tubo di separazione del siero Siringa |
| 10 ml | Becton Dickinson; BD, Franklin Lakes, NJ, USA | 302143 | |
| Pipetta di trasferimento | Samco, USA | 222-20S | |
| Pipetta di trasferimento (con punta fine) | Samco, USA | 232-20S | |
| Provetta per microcentrifuga (2,0 ml) | Eppendorf, Amburgo, Germania | 0030.120.094 | |
| Acqua sterile (priva di DNAsi e RNAsi) | Life Technologies, Carlsbad, California, USA | 10977-015 | |
| Acido formico | Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA | F0507 | |
| Soluzione a matrice | Bruker Daltonics, Brema Germania | 285074 | 10 mg/ml di acido &alfa;-ciano-4-idrossicinnamico, 50% acetonitrile, 2,5% acido trifluoroacetico |
| Benchtop microflex LT MALDI-TOF MS | Bruker Daltonics, Brema Germania | Utilizzando i software BioTyper 3.1 (Build 65) e FlexControl 3.3 (Build 99) |
Riferimenti
- Bearman, G. M., Wenzel, R. P. Bacteremias: a leading cause of death. Arch. Med. Res. 36 (6), 646-659 (2005).
- Leibovici, L., Shraga, I., Drucker, M., Konigsberger, H., Samra, Z., Pitlik, S. D. The benefit of appropriate empirical antibiotic treatment in patients with bloodstream....
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Ristampe e permessi
