, Pankreatik acinar hücreleri ve salgı kapasitesinin değerlendirilmesi
Summary
İzole pankreas acininin in vivo morfolojisi ve etkinliğini muhafaza ve izleme ve salgılanmasını işlenmesi için güçlü yollar sunuyoruz. Bu çalışma acininin fare pankreasında izole edilebilir ve bunların salgı kapasiteleri ne değerlendirilebilir gösterilmiştir.
Abstract
Pankreas asiner hücreler üretmek ve sindirim enzimleri salgılar. Bu hücreler ortak bir lümen oluşturur ve hisseleri bir küme olarak organize edilmektedir. Bu çalışma, bu hücrelerin izole edilmiş salgılama kapasitesi asini kültürü ile değerlendirilebilmektedir gösterilmiştir. Dokunulmamış ekzokrin pankreas birçok özelliklerini muhafaza izole acininin, manipüle ve tüm hayvanda daha kolay kontrol edilebilir, çünkü kurulum avantajlıdır. Ex vivo kültür asini in vivo doğayı temsil edecek şekilde pankreas asini şekilde tecrit önemli bir gerekliliktir. Protokol fare pankreas sağlam asinüsü izole etmek için nasıl gösterir. Daha sonra, pankreas salgısını değerlendirmek için iki yardımcı yöntem sunulmaktadır. Pankreas salgılarının doğrudan görüntüleme bir alt-hücresel çözünürlükte salgılanması karakterizasyonu sağlar ise amilaz salgılanması deneyi, küresel bir tedbir olarak hizmet vermektedir. Toplu olarak, bu teknikler presented burada ekzokrin salgısını incelemek için deneyler geniş bir yelpazede sağlar.
Introduction
Ekzokrin pankreas, memeli pankreas kütlesinin çoğunu oluşturur ve sindirim enzimleri 1 üretimi ve salgılanması için adanmış. Ekzokrin pankreas, acinus, fonksiyonel birim ortak bir lümen oluşturur ve hisse epitel hücrelerinin bir küme. Hormonal veya nöronal uyarım üzerine, enzim ile dolu keseler bununla birlikte apikal hücre yüzeyine taşınan sigorta ve lümen içine 1-3 içeriğini çıkarmak. Salgılanan enzimler daha sonra besin, besin parçalanmasını katalize ince bağırsağa kanalların bir birleştirme grubu tarafından drene edilir.
Bu video tüm pankreas izole edilir ve kendi salgılama kapasitesi ne kadar nasıl tespit edilebilir sağlam acininin gösterir. Bu kurulumu kullanılarak, pankreas salgı uyarılmasını takip yayımlanan amilaz nispi miktarının ölçülmesi ile ölçülür. Seçenek olarak ise, farklı salgılama kullanılmasıyla canlı görüntülenebilirsensörleri ve boyalar.
Sağlam pankreas birçok özelliklerini muhafaza izole acininin, manipüle edilen ve hayvanın tamamı 4-6 daha kolay kontrol edilebilir yana pankreas asinüs ex vivo olarak ayar avantajlıdır. Bu kurulum aslında 1970 sonlarında geliştirilen ve bu tükrük ve meme bezlerinin 3-7 gibi çeşitli ekzokrin dokuların çalışma için genişletilmiş beri oldu. Özellikle, bu polarize epitel kompleks hücresel kuruluşlara en az bir girişim ile salgılanmasının çalışma sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ex vivo kültür Bunun yanı sıra, ekzokrin salgılanmasının çalışma için alternatif düzenleri pankreatik kanal sıvıların İntra vital mikroskopik ve hesaplanmasıdır. Intravital mikroskopi tükürük bezleri 10 fare iyi faaliyet gösterilmiştir. Bu yöntem, hayvanda, gerçek zamanlı olarak salgılanmasını kaydedebilir, ama çözünürlük ve ekzokrin doku işlenmesi için aracı ile sınırlıdır. Pankreatik kanala sıvıları toplayarak salgılanmasının değerlendirilmesi, aneste…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma BS ABD-İsrail BSF bir hibe ile finanse edildi ve EDSBS Moleküler Genetik Hilda ve Cecil Lewis profesörlük sandalyenin bir görevidir.
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
Riferimenti
- Williams, J. A. Regulation of pancreatic acinar cell function. Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).
- Schnekenburger, J., et al. The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).
- Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).
- Amsterdam, A., Jamieson, J. D. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).
- Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini. The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).
- Jerdeva, G. V., et al. Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells. Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).
- Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini. Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).
- Bi, Y., Williams, J. A. A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini. Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).
- Palade, G. Intracellular aspects of the process of protein synthesis. Science. 189, 867 (1975).
- Masedunskas, A., et al. Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).
- Petersen, H., Grossman, M. I. Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats. The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).
- Riedl, J., et al. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin. Nat Methods. 5, 605-607 (2008).
- Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).
