Isolamento di cellule murine Linfonodo stromali

Maria A. S. Broggi; Mathias Schmaler; Nadège Lagarde; Simona W. Rossi

doi:10.3791/51803

È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.

Articolo metodologico

Isolamento di cellule murine Linfonodo stromali

31.6K visualizzazioni

⸱

DOI:

10.3791/51803

⸱

19 agosto 2014

Maria A. S. Broggi^*¹ , Mathias Schmaler^*¹ , Nadège Lagarde¹ , Simona W. Rossi¹

¹Department of Biomedicine, Immunoregulation, University of Basel and University Hospital Basel

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'isolamento delle cellule stromali dei linfonodi è una procedura a più fasi che include la digestione enzimatica e la disaggregazione meccanica per ottenere cellule reticolari fibroblastiche, cellule linfatiche ed endoteliali del sangue. Nella procedura descritta, una breve digestione è combinata con la disaggregazione meccanica automatizzata per ridurre al minimo la degradazione del marcatore di superficie delle cellule stromali linfonodali vitali.

Abstract

Gli organi linfoidi secondari, compresi i linfonodi, sono composti da cellule stromali che forniscono un ambiente strutturale per l'omeostasi, l'attivazione e la differenziazione dei linfociti. Vari sottogruppi di cellule stromali sono stati identificati dall'espressione della molecola di adesione CD31 e della glicoproteina podoplanina (gp38), cellule reticolari della zona T o cellule reticolari fibroblastiche, cellule endoteliali linfatiche, cellule endoteliali del sangue e periciti FRC-simili all'interno della popolazione cellulare doppia negativa. Per tutte le popolazioni sono descritte diverse funzioni, tra cui la separazione e il rivestimento di diversi compartimenti, l'attrazione e l'interazione con diversi tipi di cellule, la filtrazione dei fluidi drenanti e la contrazione dei vasi linfatici. Negli ultimi anni, diversi gruppi hanno descritto un ruolo aggiuntivo delle cellule stromali nell'orchestrare e regolare le risposte citotossiche delle cellule T potenzialmente pericolose per l'ospite.

I linfonodi sono strutture complesse con molti tipi di cellule diverse e quindi richiedono una procedura appropriata per l'isolamento delle popolazioni cellulari desiderate. Attualmente, i protocolli per l'isolamento delle cellule stromali linfonodali si basano sulla digestione enzimatica con tempi di incubazione variabili; Tuttavia, le cellule stromali e le loro molecole di superficie sono sensibili a questi enzimi, il che provoca la perdita dell'espressione del marcatore di superficie e la morte cellulare. Qui viene proposto un breve protocollo di digestione enzimatica combinato con la disgregazione meccanica automatizzata per ottenere una sospensione vitale di singole cellule di cellule stromali linfonodali che mantengono la loro espressione molecolare di superficie.

Introduzione

I linfonodi sono compartimenti specializzati in cui vengono avviate e coordinate risposte immunitarie adattative contro stranieri e di auto-antigeni. La procedura qui presentata descrive una breve digestione enzimatica combinata con pipettaggio meccanico automatizzato per ottenere linfonodo sospensione singola cella e ottenere l'accesso a linfonodali cellule stromali vitali che mantengono l'espressione di superficie di diverse molecole.

Formare cellule stromali linfonodale l'impalcatura del linfonodo e compiere tre funzioni principali: primo filtrano fluidi corporei di assaggiare antigeni, gli agenti patogeni e il loro modello....