Dimostriamo la costruzione di camere di vapori dell'alcol utilizzando materiali facilmente reperibili che ospitano contemporaneamente 6 gabbie del mouse. Descriviamo ulteriormente il loro utilizzo in un modello murino di esposizione fetale da alcol equivalente a tutti i 3 trimestri di gravidanza umana. Questo paradigma espone gli animali durante la gestazione e giorni postnatali 1-12.
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Articolo metodologico
Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante l'equivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'esposizione all'alcol durante lo sviluppo può risultare in una costellazione di anomalie morfologiche e comportamentali che sono collettivamente noti come Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Alla fine più grave dello spettro è la sindrome alcolica fetale (FAS), caratterizzata da ritardo di crescita, dismorfismi cranio-facciale, e deficit neurocomportamentali. Studi con modelli animali, tra cui roditori, hanno chiarito molti meccanismi molecolari e cellulari coinvolti nella fisiopatologia di FASDs. Somministrazione di etanolo per roditori gravidanza è stato usato per modellare esposizione umana durante il primo e secondo trimestre di gravidanza. Terzo trimestre il consumo di etanolo negli esseri umani è stato modellato utilizzando roditori neonatali. Tuttavia, pochi studi sui roditori hanno caratterizzato l'effetto dell'esposizione all'etanolo durante l'equivalente di tutti e tre i trimestri di gravidanza umana, un modello di esposizione che è comune nelle donne in gravidanza. Qui vi mostriamo come costruire camere di vapore da subito omateriali btainable che possono ciascuno ospitare fino a sei gabbie standard del mouse. Descriviamo un paradigma camera di vapore che può essere utilizzato per modellare l'esposizione a etanolo, con una minima manipolazione, durante tutte tre trimestri. I nostri studi dimostrano che le dighe in gravidanza hanno sviluppato notevole tolleranza metabolica all'etanolo. Tuttavia, i topi neonatale non hanno sviluppato la tolleranza metabolica e il numero di feti, il peso del feto, il peso della placenta, il numero di cuccioli / figliata, il numero di morti cuccioli / figliata, e il peso dei cuccioli non è risultata significativamente influenzata dall'esposizione etanolo. Un importante vantaggio di questo paradigma è la sua applicabilità a studi con topi geneticamente modificati. Inoltre, questo paradigma riduce al minimo la manipolazione degli animali, un importante confondere nella ricerca alcolica fetale.
Introduzione
Bere durante la gravidanza può danneggiare il feto, causando alterazioni persistenti in molti organi e sistemi che riducono in modo significativo la qualità della vita per le persone colpite e delle loro famiglie. Si stima che circa il 10-30% delle donne beve durante la gravidanza negli Stati Uniti, con il 1-8% di bere in un modello di 1,2 binge. La gamma di effetti prodotti dall'esposizione etanolo durante lo sviluppo fetale è collettivamente noti come disturbi dello spettro fetale alcolica (FASDs). Stime recenti indicano che FASDs sono un problema di salute pubblica con una prevalenza fino al 2-5% negli USA 3. Il più grave manifestazione d....
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Protocollo
Tutte le procedure di animali sono state approvate dalla University of New Mexico Scienze della Salute-Centro Institutional Animal Care ed uso comitato.
1. Vapor Chamber Assembly
- Tagliare i fogli di policarbonato con una sega circolare o seghetto alle dimensioni previste nel video per la parte superiore, inferiore, anteriore, posteriore, lati e porta (Figura 1 e Tabella 1).
- Con una sega circolare o seghetto, tagliare un'apertura alta 8 pollici da 16 pollici di larghezza nel mezzo del pannello frontale.
- Misurare e segnare i fori per la cerniera pianoforte sul 18 pollici da 10....
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Risultati
Figura 2A mostra che sia i topi in gravidanza e prole neonatale sono stati esposti a concentrazioni di vapori di etanolo relativamente stabili nelle camere. Questi variavano tra 4-6 g / dl. Figura 2B mostra i BECs conseguiti nei topi in gravidanza in funzione del tempo. BEC sono stati misurati utilizzando un alcool deidrogenasi standard basato dosaggio 48. A G5, BECs rapidamente salito a ~ 60 mM 2 ore dopo l'inizio dell'esposizione e ha raggiunto la fine del periodo di esposi.......
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Discussione
Qui, descriviamo in dettaglio i metodi per la costruzione delle camere di inalazione di vapori. I materiali e gli strumenti necessari per costruire le camere sono prontamente disponibili un certo numero di fornitori commerciali e la procedura per la costruzione delle camere sono relativamente semplici. Il sistema che descriviamo qui non contiene valvole di ritegno in linea per impedire il riflusso e la miscelazione. Siamo stati in grado di misurare qualsiasi etanolo rilevabile in aria solo camere che suggeriscono che no.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Sostenuto dal National Institutes of Health concede R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 e K12-GM088021. Gli autori ringraziano Samantha L. Blomquist per l'assistenza tecnica e Drs. Kevin Caldwell e Donald Partridge per valutare criticamente il manoscritto e video.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Policarbonato 1/4" trasparente 48" x 24" | McMaster-Carr | 8574K23 | 10 |
| Guarnizione a bulbo in gommapiuma 3/8"w x 7/32"h | McMaster-Carr | 93085K67 | 10 ft |
| Weld-on #16 | McMaster-Carr | 7515A11 | 3 |
| Cerniera per pianoforte lunga 12" | McMaster-Carr | 1658A11 | 2 x 1 ft |
| Morsetti a levetta standard | McMaster-Carr | 5126A26 | 8 |
| Tubo PEX 1/2" | McMaster-Carr | 51275K88 | |
| Raccordo a T spinato da 10 piedi (Nero) Confezione 10 | McMaster-Carr | 5463K608 | 1 |
| Tappo spinato (Nero) Confezione 10 | McMaster-Carr | 5462K79 | 1 |
| Spina Gomito raccordo (Nero) Confezione 10 | McMaster-Carr | 5463K596 | 1 |
| Adattatori passanti da 3/8", tubo a tubo filettato | McMaster-Carr | 5463K851 | 1 |
| Vite a croce Phillips 4-40 | McMaster-Carr | 91772A112 | 1 |
| Dado esagonale a vite a macchina 4-40 | McMaster-Carr | 90480A005 | 1 |
| Flussometro a pannello 2-20 | McMaster-Carr | 41945K76 | 3 |
| PARCHETTA, FILTRO 1.000 ml 6/CONFEZIONE | VWR | 89001-800 | numero arabo |
| Guarnizione di precisione Septa | VWR | 89084-490 | 1 |
| VWR Black Rubber Stopper #8 1-foro | VWR | 59581-367 | 1 |
| TUBO TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR | 89068-556 | 1 | |
| TUBO TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR | 89068-502 | 1 | |
| Aeratore Stone P2120 | VWR | 32573-007 | 1 |
| 3/8" T-connettori Pk da 20 | VWR | 46600-060 | 1 |
| VWR Sezionatori conici Pk di 10 | VWR | 46600-110 | 1 |
| 3/8 Tubo flessibile Barb con valvola di accoppiamento in linea | Più freddo Prodotti Azienda | HFCD17612 | 1 |
| Pompa ad aria di media capacità | LMI Produttori | DB60L | 1 |
| Nexelate Wire Shelving 36 "L X 24" P X 63 "H | T9A990135 industriale globale | 1 | |
| Set di (4) ruote in poliuretano da 5" Global | industrial | T9A500591 | 1 |
Riferimenti
- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
- Ethen, M. K., et al.
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Ristampe e permessi
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