In tempo reale Imaging di cellule mieloidi Dynamics in Apc Min / + Intestinale tumori da Spinning Disk Microscopia confocale

Caroline Bonnans; Marja Lohela; Zena Werb

doi:10.3791/51916

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Articolo metodologico

In tempo reale Imaging di cellule mieloidi Dynamics in Apc^{Min / +} Intestinale tumori da Spinning Disk Microscopia confocale

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DOI:

10.3791/51916

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6 ottobre 2014

Caroline Bonnans^*¹^,² , Marja Lohela^*² , Zena Werb²

¹Department of Oncology, INSERM U661, Functional Genomic Institute, ²Department of Anatomy, University of California

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Utilizzando topi reporter transgenici ed etichette fluorescenti iniettabili, la microscopia confocale a disco rotante intravitale a lungo termine consente la visualizzazione diretta del comportamento delle cellule mieloidi nell'adenoma intestinale nel modello di cancro colorettale Apc^Min/+.

Abstract

Cellule mieloidi sono i più abbondanti cellule immunitarie all'interno di tumori e hanno dimostrato di promuovere la progressione tumorale. Le moderne tecniche di imaging intravitale permettono l'osservazione del comportamento cellulare dal vivo all'interno dell'organo, ma può essere difficile in alcuni tipi di cancro a causa di organo e tumore accessibilità, come l'intestino. L'osservazione diretta dei tumori intestinali non è stato segnalato in precedenza. Una procedura chirurgica qui descritta permette l'osservazione diretta delle dinamiche di cellule mieloidi all'interno dei tumori intestinali nei topi dal vivo utilizzando topi transgenici reporter fluorescente e traccianti iniettabili o anticorpi. A questo scopo, è stato utilizzato un quattro-colore, multi-regione, disco rotante microscopio confocale micro-lensed che consente a lungo termine di imaging continuo con l'acquisizione rapida di immagini. Apc ^{Min / +} topi che sviluppano più adenomi nel piccolo intestino è attraversato con i topi c-fms-EGFP per visualizzare le cellule mieloidi e con i topi ACTB-ECFPper visualizzare le cellule epiteliali intestinali delle cripte. Sono inoltre descritte le procedure per etichettare diversi componenti tumorali, come i vasi sanguigni e neutrofili, e la procedura per il posizionamento del tumore per l'imaging attraverso la superficie sierosa. Filmati time-lapse compilati da diverse ore dell'imaging consentono l'analisi del comportamento delle cellule mieloidi in situ nel microambiente intestinale.

Introduzione

Prove schiaccianti ora dimostra che il microambiente tumorale, costituito da popolazioni cellulari eterogenee, inclusi i fibroblasti, cellule endoteliali, cellule immunitarie e infiammatorie, matrice extracellulare e fattori solubili, svolge un ruolo cruciale nella iniziazione e progressione dei tumori solidi contribuendo a quasi tutti caratteristiche di cancro ^1. Infatti, durante la progressione del tumore, ci sono costanti interazioni dinamiche tra cellule tumorali trasformate e le cellule stromali che si evolvono per generare un microambiente favorevole alla malignità ^2. Tra le cellule immunitarie che infiltrano il microambiente tumorale, le ....