चूहे में Taxanes के फार्माकोकाइनेटिक और pharmacodynamic विश्लेषण के लिए मन्या धमनी आधान
Summary
इस विधि माउस मॉडल में उपन्यास दवाओं की फार्माकोकाइनेटिक्स का आकलन करने के लिए, मन्या धमनी के माध्यम से एक स्थिर दवा समाधान पहुंचाने के लक्ष्य के साथ विकसित किया गया था.
Abstract
एक उपन्यास प्रणाली में एक दवा, दवा संयोजन, या दवा वितरण के उपयोग का प्रस्ताव है, एक अध्ययन मॉडल में दवा की फार्माकोकाइनेटिक्स का आकलन करना चाहिए. माउस मॉडल का उपयोग अक्सर पूर्व नैदानिक दवाओं की खोज और नशीली दवाओं के विकास 1-8 में एक महत्वपूर्ण कदम है, यह एक वर्दी, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से चूहों में दवाओं को पेश करने के लिए एक प्रणाली डिजाइन करने के लिए आवश्यक है. आदर्श रूप में, प्रणाली एक निर्धारित समय पाठ्यक्रम पर नियमित अंतराल पर रक्त के नमूनों के संग्रह की अनुमति चाहिए. जन स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा दवा सांद्रता उपाय करने की क्षमता, व्यक्तिगत चूहों 1, 9, 10 में समय के साथ प्लाज्मा दवा के स्तर में परिवर्तन का पालन करने के लिए जांचकर्ताओं को अनुमति दी गई है. इस अध्ययन में, Paclitaxel तीन पर एक निरंतर धमनी अर्क के रूप में ट्रांसजेनिक चूहों में पेश किया गया था घंटे, रक्त के नमूनों को एक साथ निर्धारित समय बिंदुओं पर रेट्रो कक्षीय bleeds द्वारा लिया गया है. कैरोटिड धमनी लेनी गले नस सुई लेनी के लिए एक संभावित विकल्प, जब कारकों जैसे हैंस्तन ट्यूमर या अन्य अवरोधों कंठ लेनी अव्यावहारिक बना. इस तकनीक का उपयोग करना, प्लाज्मा और ऊतकों में Paclitaxel सांद्रता कंठ निषेचन की तुलना में समान स्तर हासिल की. इस ट्यूटोरियल में, हम सफलतापूर्वक अलग-अलग माउस मॉडल के लिए एक अनुकूलित कैथेटर की तैयारी से कैरोटिड धमनी कैथीटेराइज़ करने के लिए प्रदर्शन करेंगे, तो डालने और माउस मन्या धमनी में कैथेटर सुरक्षित, पीछे के माध्यम से बाहर कैथेटर के अंत धागा करने के लिए कैसे दिखाने माउस की गर्दन की, और दवा बाढ़ की एक नियंत्रित दर देने के लिए एक पंप करने के लिए माउस हुक. एकाधिक कम मात्रा रेट्रो कक्षीय bleeds समय के साथ प्लाज्मा दवा सांद्रता के विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं.
Introduction
मन्या के माध्यम से नशीली दवाओं के अर्क उपकरण और तकनीक के अनुकूलन द्वारा मज़बूती और reproducibly किया जा सकता है. यह विस्तार करने के लिए ठीक नियंत्रण और ध्यान देने की जरूरत है, हालांकि प्रक्रिया जटिल नहीं है. बेहतर देखभाल और निपुणता मन्या धमनी अलग करने और आम तौर पर अभ्यास के माध्यम से हासिल किया जा सकता है जो कैथेटर, सम्मिलित करने के लिए आवश्यक हैं. एक अनुभवी तकनीशियन द्वारा सर्जरी एक घंटे से अधिक नहीं होना चाहिए. (माउस वास्तविक दवा निषेचन के लिए प्रतिक्रिया हो सकती है, हालांकि) सफल सर्जरी के बाद, माउस सामान्य और स्वस्थ दिखाई देनी चाहिए, और दवा (एस) के एक नियंत्रित, वर्दी निरंतर खुराक में दिलाई जा सकती है. रक्त के नमूने मन्या धमनी के अलावा किसी अन्य साइट से लिया जाना चाहिए; रेट्रो कक्षीय bleeds दवा सांद्रता के विश्लेषण के लिए एकत्र करने के लिए आसान और संतोषजनक साबित कर दिया.
इष्टतम आकार और आकृति की कैथेटर्स एक सफल निषेचन 11 प्रदर्शन में एक अमूल्य संपत्ति हैं. हम कैथेटर उपलब्ध commerciall पायाY अक्सर बहुत बड़ी है और / या माउस मन्या धमनी के लिए सुविधाजनक उपयोग के लिए अनुमति देने के लिए भी लचीला होना. यह अर्क सिरिंज के लिए माउस कनेक्ट किया पॉलीथीन ट्यूबिंग से फैशन कैथेटर के लिए बेहतर साबित हुआ. इस प्रकार, सभी ट्यूबिंग, कनेक्टर्स और सुइयों के अर्क विधानसभा सरलीकृत जो लगातार आयामों के थे. इस तकनीक का उपयोग करना, यह अभी भी दिखाई दे रहा है, और मन्या धमनी में रक्त प्रवाह को कैथेटर शुरू में सुरक्षित है के बाद जब तक बहाल नहीं किया जाता है इस मुद्दे पर जहां पिछले धमनी में कैथेटर की नोक पुश करने के लिए आवश्यक नहीं है. यह धमनी puncturing की या कैथेटर होने के खतरों रक्त प्रवाह की उच्च दबाव से बाहर धक्का दे दिया कम कर देता है. कैथेटर डिजाइन के साथ साथ इतना sutures के साथ अच्छी तरह से कैथेटर को सुरक्षित और सर्जिकल टेप एक प्राथमिकता है, एक जगह में पकड़ करने के लिए "टक्कर" को शामिल नहीं करता है.
आधान के नैदानिक प्रशासन की एक बेहतर नकल के रूप में, आम चतुर्थ सांस में इंजेक्शन के लिए बेहतर हो सकता हैऐसे taxanes 3, 12, यहाँ वर्णित 13. तकनीक के रूप में दवाओं के मूल कंठ या और्विक शिरा के लिए उपयोग स्तन ट्यूमर के विकास और / या प्रविष्टि क्षेत्र के अत्यधिक vascularization से रोका गया था जिसमें माउस मॉडल में जान फूंकना अनुमति देने के लिए विकसित किया गया था. इस विधि अक्सर भी ट्यूमर से मुक्त चूहों में उपयुक्त हो सकता है: कंठ दीवार की प्रवृत्ति अधिक विफल सम्मिलन और पूरा करने के लिए विफलताओं के परिणामस्वरूप चीर क्योंकि अलग और मन्या catheterizing हालांकि थोड़ा अधिक आक्रामक, हम इसे बेहतर कंठ पाया जाता है 3 घंटा समय पाठ्यक्रम.
यहाँ दिखाए गए परिणामों C57BL / 6J से हैं जबकि (घर में नस्ल) चूहों, हम सफलतापूर्वक transgenically चालाकी माउस मॉडल में फार्माकोकाइनेटिक्स का पालन करने के लिए, FVB और मिश्रित उपभेदों सहित चूहों के कई उपभेदों, में Paclitaxel तर करने के लिए इस तकनीक का इस्तेमाल किया है सेलुलर ट्रांसपोर्टर कार्यों नीचे विनियमित करने के लिए. रक्त और ऊतकों के नमूनों paclitax की उम्मीद स्तर से पता चला एकत्रएल, कंठ लेनी 1 के बाद देखा के स्तर की रेंज में. इस तकनीक को अन्य माउस मॉडल में और अन्य आसव समाधान के साथ समान रूप से अच्छी तरह से काम करने की उम्मीद की जा सकती है.
Protocol
Representative Results
Discussion
कैरोटिड धमनी अर्क Paclitaxel फार्माकोकाइनेटिक्स के इस अध्ययन में एक महत्वपूर्ण तकनीक है. कैरोटिड धमनी अर्क जल्दी से संचार प्रणाली 14 भर में दवा वितरित करने के लिए एक विधि है. 3 घंटा अर्क ऐसे सांस में इंजेक्…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम इस परियोजना में उनके समर्थन के लिए FCCC प्रयोगशाला जानवरों की सुविधा स्वीकार करना चाहते हैं. हम प्लाज्मा और ऊतकों में Paclitaxel के स्तर का विश्लेषण करने में उनकी सहायता के लिए वोल्फ प्रयोगशालाओं, Inc धन्यवाद. इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान EHB को K01CA120091 अनुदान, और CA06927 फॉक्स के लिए चेस कैंसर केंद्र द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Table of specific reagents and equipment: | Source: | Catalog Number | Comments |
| Polyethylene tubing 0.024”OD X 0.011”ID | Braintree Scientific, Inc. | PE10 | |
| Stainless steel port plug (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | NB-30 | |
| 2 Stainless steel connector plugs (28 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | PP-28 | Slightly larger than PE tubing ID, to fit snugly and keep a tight seal. |
| 3 Blunted needles (30 gauge) | Braintree Scientific, Inc. | C-30 | |
| 3 1cc syringes | Becton, Dickinson and Co. | 309659 | |
| Sterile 0.9% Saline solution | Hospira | 0409-7984-37 | |
| Cath-Loc HGS Heparin/Glycerol Solution | Braintree Scientific, Inc. | HGS | |
| Silk suture | Braintree Scientific, Inc. | SUT-S 113 | |
| Vanna Scissors (micro-scissors) | World Precision Instruments | 14122 | This model has a curved tip, but straight-tip scissors work as well. |
| Hartman Mesquito Hemostatic Forceps | World Precision Instruments | 501705 | |
| Betadine Swabsticks | Perdue Products L.P. | BSWS1S | |
| Bupivacaine | Hospira | 0409-1160-01 | May be replaced with Lidocaine, or similar local anesthesia. |
| Paclitaxel | LC Laboratories | P-9600 | |
| Methanol | Sigma-Aldrich | 32213 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes, Heparinized | Fisher Scientific | 22-362-566 | |
| Capillary Tube Sealant | Fisher Scientific | 02-678 | |
| C57BL/6J mice | Fox Chase Cancer Center, Laboratory Animal Facility in-house-bred | ||
| API 4000 Q-Trap mass spetrometer | Applied Biosystems |
Riferimenti
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