Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)
Summary
In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.
Abstract
Rekombinant doku plazminojen aktivatörü (tPA) kullanımı ile Klinik, trombolitik tedavi akut iskemik inme için en etkili tedavi yöntemidir. Bununla birlikte, tPA ve kullanımı bu yakın tedavi açısı ile ve hemorajik transformasyon riski ile sınırlıdır. Iskemik inme tedavisi için yeni trombolitik ajanlar ve stratejiler incelemek için uygun inme modeller geliştirmek için acil bir ihtiyaç vardır. Intraluminal sütür MCAO'dan ve embolik MCAO'dan: Şu anda, iskemik inme modelleri başlıca iki türü sıçanlar ve farelerde geliştirilmiştir. Intraluminal sütür tekniği ile MCAO modeller yaygın mekanizması odaklı inme araştırmalarında kullanılan rağmen, bu sütür modelleri klinik durumu taklit değil ve trombolitik çalışmalar için uygun değillerdir. Bu modeller arasında, emboli MCAO modeli yakından insan iskemik inme taklit ve trombolitik tedavinin klinik öncesi araştırma için uygundur. Bu emboli modelin ilk Ov tarafından sıçanlarda geliştirilen1992 yılında diğ. 1 ergaard ve ayrıca Zhang ve arkadaşları tarafından karakterize edilir. 1997 2'de. embolik MCAO artan ilgi kazanmış olmasına rağmen, çok sayıda laboratuarlar tarafından karşılaşılan sorunlar vardır. Trombolitik araştırma için artan ihtiyaçlarını karşılamak için, biz MCA topraklarında öngörülebilir bir enfarktüs hacmini geliştirmek sıçan, embolik MCAO'dan son derece tekrarlanabilir model sunuyoruz. Kısaca, bir tadil edilmiş 50-PE tüp hafifçe MCA kökenini ulaşır kateterin ucuna kadar iç karotid arterin (ICA) lümenine dış karotid arter (ECA) ilerletilir. Kateter sayesinde, tek bir homolog kan pıhtısı MCA kökeni yerleştirilir. MCA tıkanıklığının başarısını belirlemek için, bölgesel serebral kan akımı izlendi, nörolojik açıkları ve enfarktüs hacimleri ölçüldü. Bu çalışmada sunulan teknikler inme araştırma için bu modeli kurulması için teknik sorunların üstesinden gelmek için araştırmacılara yardımcı olmalıdır. </ P>
Introduction
İnme ABD'de ölüm üçüncü önde gelen nedenidir, ancak akut inme için tedavi seçenekleri sınırlı kalmıştır. Şu anda, kan pıhtıları çözmek için yeniden birleştirici doku plazminojen aktivatörü (tPA) intravenöz infüzyon akut iskemik inmenin en etkili yöntemdir. Bununla birlikte, tPA ve kullanımı bu yakın tedavi açısı ile ve intraserebral kanama riski ile sınırlıdır. Bu nedenle, trombolitik araştırma için uygun inme bir modeli acilen ihtiyaç vardır.
Orta serebral arter (OSA) en sık insanlarda inme tıkalı arter olduğunu. Bu arter üzerinde duruldu, iskemik inme birçok hayvan modelleri kurulmuştur. Şu anda, MCA tıkanarak kemirgen fokal iskemi modelleri başlıca iki tip geliştirilmiştir: sütür MCAO modeli ve embolik MCAO modeli. Intraluminal sütür tekniği ile MCAO modeller yaygın mekanizması odaklı inme araştırmalarında kullanılan olmasına rağmen, bu dikiş modelleri yokİnsan strok% 80'ine kadar olan mimik insan felç, tromboz veya embolizmden kaynaklanır. Ancak, kan pıhtıları kullanarak embolik inme modeli yakından insan inme taklit ve trombolitik çalışma için uygun kabul edilir. Bu model, embolik ilk olarak 1992 yılında Overgaard ve ark. 1 ile sıçanlarda geliştirilmiş ve Zhang ve arkadaşları tarafından karakterize edildi. 1997 2 ve Dinapoli ve ark. 2006 3'te. Embolik MCAO artan bir ilgi kaynağı haline gelmiş olmasına rağmen, karşılaşılan sorunlar vardır, birçok laboratuvar.
Bu yazıda, MCA topraklarında öngörülebilir bir enfarktüs gelişebilir yetişkin sıçan homolog kan pıhtısı ile embolik MCAO'dan üretilmesi için standart bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu makalede sunulan teknikler Araştırmacılar felç araştırma için bu modeli kurulması için teknik sorunların üstesinden gelmek için yardımcı olmalıdır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu çalışmada, MCA kökeni, bir fibrin pıhtısı zengin tarafından kapatılan edildiği sıçan, bir embolik MCAO felç modelinde gerçekleştirmek için standart bir yöntem gösterilmiştir. Bu modelin en büyük avantajı ise: fibrin-zengin kan pıhtısı ile MCA kök tıkanıklığı insanlarda tromboembolik inme benzer, embolik inme modeli fibrinolitik tedavinin klinik öncesi soruşturma yapılması için uygundur, ve bu model geliştirmek olduğunu MCA tarafından sağlanan topraklarında bir tekrarlanabilir …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by National Institutes of Health grants HL087990 (G.L.).
Materials
| rh-tPA | Chemical | Genentech | |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Chemical | Sigma | T8877 |
| Anesthesia vaporizer | Equipment | Soma Technology | Drager Vapor 19.1 |
| Rechargeable high speed micro drill | Equipment | Fine Science Tools | 18000-17 |
| Curved scissors | Equipment | Fine Science Tools | 14117-14 |
| Dumont forceps(Medical #7) | Equipment | Fine Science Tools | 11270-20 |
| Dumont forceps(Medical #5) | Equipment | Fine Science Tools | 11251-35 |
| Vannas-style spring scissors | Equipment | Fine Science Tools | 15000-03 |
| Veterinary recovery chamber | Equipment | Peco Services | V1200 |
| Genie plus syringe pump | Equipment | Kent Scientific Corporation | |
| Rat brain matrix | Equipment | Kent Scientific Corporation | RBMA-310C |
| Digital caliper | Equipment | World Precision Instruments | 501601 |
| Dissecting microscope | Equipment | World Precision Instruments | PZMTIII-BS-LWD |
| Hamilton syringe | Equipment | Hamilton | model 710 |
| Homeothermic blanket control unit | Equipment | Harvard Apparatus | |
| Electric clipper | Equipment | Braintree Scientific | CLP-9931 |
| Veterinary electrosurgical unit | Equipment | MACAN Manufacturing Company | MV-9 |
| Blood flowmeter | Equipment | Adinstruments | |
| PowerLab 4/30 | Equipment | Adinstruments | |
| LabChart 7.2 | software | Adinstruments | |
| 1ml syringe | Consumable | Becton, Dickinson and Company | 309659 |
| 23G needle | Consumable | Becton, Dickinson and Company | 305143 |
| 30G needle | Consumable | Becton, Dickinson and Company | 305106 |
| PE-50 tubing | Consumable | Becton, Dickinson and Company | 427517 |
| PE-10 tubing | Consumable | Becton, Dickinson and Company | 427400 |
| 6-0 Silk suture | Consumable | Harvard apparatus | 723287 |
| 5-0 Silk suture | Consumable | Harvard Apparatus | 517607 |
Riferimenti
- Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli. J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).
- Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A rat model of focal embolic cerebral ischemia. Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).
- Dinapoli, V. A., Rosen, C. L., Nagamine, T., Crocco, T. Selective MCA occlusion: a precise embolic stroke model. J. Neurosci. Methods. 154 (1-2), 233-238 (2006).
- Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements. J Vis Exp. 59 (3496), (2012).
- Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
- Henninger, N., Bouley, J., Bråtane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke. Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).
- Zhu, H., et al. Annexin A2 combined with low-dose tPA improves thrombolytic therapy in a rat model of focal embolic stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 30 (6), 1137-1146 (2010).
- Cheng, T., et al. Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage. Nat Med. 2 (11), 1278-1285 (2006).
- Taniguchi, H., Andreasson, K. The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia. J Vis Exp. 21 (955), (2008).
- Sicard, K. M., Fisher, M. Animal models of focal brain ischemia. Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).
- Florian, B., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).
- Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).
- Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis. BMC Neurol. 11 (110), (2011).
