마우스에 현지 아나필락시스 측정
Summary
비만 세포와 호염기구의 활성화를 특징으로 알레르기 반응은, IgE 항체의 가교 및 염증 매개 물질의 방출에 의해 구동된다. 알레르기 반응의 정량적 인 평가는 알레르겐 공격 후 혈관 투과성의 변화를 모니터하는 에반스 블루 염료를 사용함으로써 달성 될 수있다.
Abstract
알레르기 반응은 비만 세포 및 호염기구, 및 혈관 작용 및 염증 매개체의 후속 릴리스의 활성화의 결과이다. 감작 된 개인의 알레르기 항원에 노출되면 약간의 홍반에서 생명을 위협하는 아나필락시스까지 다양 임상 증상이 발생할 수 있습니다. 실험실에서, 다양한 동물 모델은 알레르기 반응을 구동 메커니즘을 이해하기 위해 개발되었다. 여기서, 우리는 지역화 알레르기 반응을 정량화 혈관 투과성의 변화를 측정하기위한 자세한 방법을 설명합니다. 지역 아나필락시스 분석은 첫째 1920 년대에보고하고, 코지마 외 출판 기술에서 적응하고있다. 2007 년 한.이 분석에서, OVA로 감작 마우스는 차량 왼쪽 귀에 및 OVA와 오른쪽 귀에 도전한다. 이것은 에반스 블루 염료의 정맥 내 주사에 의해 이어진다. 텐 분 에반스 블루를 주입 한 후, 동물은 extravasated에있다 염료 안락사되고귀에 포름 아미드 하룻밤 추출된다. 추출 염료의 흡광도 후 분광 광도계 정량화된다. 이 방법은 확실하게 지역의 알레르기 반응의 시각 및 정량화 할 수있는 징후가 발생합니다.
Introduction
타입 I의 과민 반응은 비만 세포와 호염기구의 표면에 IgE 항체의 항원 – 유도 된 가교 결합에 의해 매개된다. 이 세포의 탈과립과 히스타민, 트립 타제 및 혈소판 활성화 인자 (2)와 같은 혈관 작용 및 염증 매개 물질의 방출에 발생합니다. 탈과립 동안 예비 성형 매개 물질의 방출에 이어, 비만 세포는 합성하고 또한 혈관 투과성 3을 증가하는 프로스타글란딘과 류코트리엔을 놓습니다. 초기 임상 반응이 급격히 발생하여 "즉각적인 반응"이라한다. 피부에, 피부 발진 및 플레어 반응은 항원 도전 분 이내에 쉽게 볼 수 있습니다. 도전 복용량에 따라, "늦은 위상 응답"몇 시간 후를 관찰하는 것이 가능하다. 후기의 부종은 조직이로 현지화 부종 및 백혈구 모집 때문이다. 히스타민, 일반적에 참여 주요 매개체로 간주즉각적인 알레르기 반응은, 한 (HR1)의 선박과 히스타민 수용체 2 (HR2) 평활근에 표현에 표현 된 히스타민 수용체에 작용한다. 결합 된 효과는 염증 넷의 사이트에서 혈액의 흐름과 혈관 투과성을 증가시킨다.
알레르기 동물 모델의 다양한 알레르기 성 천식, 전신성 아나필락시스, 지역 과민증의 모델을 포함한 알러지 염증과 관련된 기전을 연구하기 위해 개발되었다. 정맥 염료 관리는 출판물이 1920 년대 5로 다시이 기술 데이트를 기술로, 거의 한 세기에 대 한 동물 모델에서 지역화 된 알레르기 반응을 측정하는 데 사용되었다. 토끼, 기니피그 즉각적인 과민성 반응을 검사하는 데 사용되는 제 동물 모델이었으며, 가장 민감한 반응은 일반적으로 귀 5,6에서 발견되었다. 분석은 이후 래트 (7) 및 마우스 (8)에 사용하기 위해 유효 하였다.
역사적으로,실험 다양한 방법 전에 염료를 주입, 염료를 주입하기 전에 항원의 주입에 항원을 주입하고, 염료 및 항원의 동시 분사로 사용되었다. 알레르기 반응을 측정하기위한 수단으로서 염료 정맥 투여는 수동, 활성 측정에 사용하고, 수동적 반응 5,9 반전 될 수있는 다목적 분석이다. 수많은 염료 트리 판 블루, Pontamine 스카이 블루, 에반스 블루,이기 블루 536, 인도 잉크 5,6,9 포함 알레르기 반응을 평가하기 위해 사용되었다. 0.5 % 에반스 블루의 용액은 현재 피부에 알레르기 반응을 측정하기 위해 사용되는 표준 염료이다.
도전에 대한 아나필락시스 반응은 과도하다; 최대 강도 (10) 내에 도달 – 염료 주입 15 분, 염료에 관계없이 구에 사용되는 동물 종, 공격 후 30 분을 투여하는 경우에는 반응은 볼 수 없습니다. 염료의 혈관 외 유출의 정량화는 원래이었다LY 파란색 염료 7-9으로 표시된 바와 같이 팽진 크기를 측정하여 얻을 수 있습니다. 또한 degranulated 비만 세포의 수는 반응 부위에서 피부 조직을 절개하고 7 톨루이딘 블루 염색에 의해 정량화 될 수있다. 비만 세포는 높은 친화도의 IgE 수용체 FcεRI를 발현 주요 지방 세포 집단 마찬가지로 비만 세포 탈과립은 종종 피부, IgE 매개 알레르기 반응을위한 마커로서 사용된다. 조직 염색에 넘쳐 분광 광도 측정을위한 기술은 1990 년 10 래트 및 마우스 (11)의 수동적 피부 아나필락시스 (PCA)를 위해 개발되었다.
다음 지역 아나필락시스 분석 프로토콜. 코지마 외에서 1을 적용하고, 알레르기 반응을 이끌어 내기위한 항원으로 닭 계란 난백 알부민 (OVA)를 사용 하였다. 그러나, 원한다면 이외 OVA 항원을 사용할 수있다. 분석은 다음 permeabilit 혈관의 변화를 모니터하는 에반스 블루 염료를 사용세포의 IgE 가교 및 히스타민의 방출을 비만으로 인해 발생하는 y를 입력합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
알레르기 질환의 많은 마커기도 도전의 설정에서 기관지 유체에 순환 히스타민의 Th2 사이토 카인의 생산, 세포 모집의 수준의 변화를 포함하여 알레르기 항원의 반칙으로 알레르기 반응의 강도를 평가하는 데 사용됩니다. 이러한 매개 변수에 변화를 모니터링하는 알레르기 반응을 연구하는 것도 중요하지만, 생물학적 마커는 항상 임상 알레르기 질환과 상관 관계가 없습니다. 이 프로토콜에 설?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors would like to acknowledge Dr. Ellen M. Fox for her work regarding this model of local anaphylaxis. This work was supported by the Uniformed Services University of the Health Sciences grant number R073UE.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| BALB/c Mice | The Jackson Laboratory | 651 | |
| PBS pH 7.4 | Quality Biologic | 114-058-101 | |
| Ovalbumin | Sigma | A5503-10G | |
| Imject Alum | Thermo Scientific | 77161 | Mix thoroughly before use |
| Evans Blue Dye | Sigma | E2129 | |
| Formamide | Sigma | 295876 | 99%+ Spectrophotometric grade |
| Isoflurane, USP | Phoenix | NDC 57319-474-06 | |
| 1cc Insulin syringes | BD | 329654 | |
| 3/10 cc Insulin syringe with 31G needle | Terumo | NDC 100861 | |
| 27G Needles | BD | 305109 | |
| Forceps | F.S.T. | 11000-12 | |
| Surgical scissors | F.S.T. | 14070-12 | |
| 5ml Polystyrene round-bottom tubes | BD Falcon | 352058 | |
| 1.5ml Microcentrifuge tubes | Medical Supply Partners | 15-1151 | |
| 15ml Conical tubes | BD Falcon | 352097 | |
| Flat-bottom 96 well plate | Costar | 3590 | |
| Scotch tape | |||
| RC2 Rodent Anesthesia System | VetEquip | 922100 | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries | SI-0236 | Model G560 with 3 inch platform |
Riferimenti
- Kojima, T., et al. Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner. The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).
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