Creazione anatomicamente accurati e riproducibili intracranica xenotrapianti di tumori cerebrali umani

Summary

Il cervello è un sito unico con qualità che non sono ben rappresentati da in vitro o analisi ectopiche. Modelli di mouse ortotopico con caratteristiche di localizzazione e di crescita riproducibili possono essere attendibilmente creati con iniezioni intracraniche utilizzando uno strumento di fissazione stereotassico e una pompa a siringa a bassa pressione.

Abstract

Modelli di tumore ortotopico sono attualmente il modo migliore per studiare le caratteristiche di un tipo di tumore, con e senza l'intervento, nel contesto di un animale vivo - in particolare in siti con caratteristiche uniche fisiologici e architettonici come il cervello in vitro e modelli ectopiche non possono. tenere conto di caratteristiche quali vasi, il sangue barriera del cervello, il metabolismo, somministrazione di farmaci e la tossicità, e una miriade di altri fattori rilevanti. Modelli ortotopico hanno i loro limiti troppo, ma con adeguate cellule tumorali tecnica di interesse possono essere innestate con esattezza in tessuto che più strettamente imita le condizioni nel cervello umano. Utilizzando metodi che forniscono i volumi misurati con precisione a definire con precisione posizioni ad una velocità costante e pressione, modelli murini di tumori cerebrali umani con tassi di crescita prevedibili possono essere riproducibile creati e sono adatti per un'analisi attendibile dei vari interventi. Il protocollo qui descritto si concentra sul tedettagli chnical di progettazione e preparazione per l'iniezione intracranica, eseguire l'intervento chirurgico, e garantire la crescita del tumore e di successo riproducibile e fornisce i punti di partenza per una serie di condizioni che possono essere personalizzati per una vasta gamma di diversi modelli di tumore al cervello.

Introduction

Studi in vitro su cellule tumorali del cervello sono di valore inestimabile per sezionare i meccanismi molecolari che guidano la crescita, la sopravvivenza, la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali; esperimenti sulle cellule in coltura possono definire vie di segnalazione, suggerire potenziali bersagli terapeutici, e caratterizzare la risposta cellulare al trattamento farmacologico. Ma in vitro sistemi sono troppo semplicistico per predire la risposta ai farmaci organismal; mancano le reazioni fisiologiche, le risposte immunitarie, microambiente cellulare, e eterogeneità complessiva dei sistemi viventi animali. Geneticamente modelli di....

Protocol

Tutte le procedure descritte sono stati esaminati e approvati dal nostro cura degli animali e l'uso comitato istituzionale.

1 Piano Experiment

1. Scegli le cellule da iniettare. Le cellule provenienti da una varietà di fonti sono candidati per l'iniezione: aderenti linee di coltura cellulare, cloni geneticamente modificati, cellule neurosfere, colture primarie, o tumori disaggregati. Il tipo di modello desiderato definirà la sede più idonea di iniezione.
   1. Determinare il numero di cellule per l'iniezione. Il numero di cellule necessario per formare tumori varia con la linea cellulare e deve essere determinato em....

Results

Xenotrapianti intracranica affidabili possono essere creati con questa tecnica descritta. Identificare le strutture critiche del cranio del mouse (Figura 1), consentirà il riconoscimento del bregma e guidare il ricercatore in una posizione di iniezione precisa e riproducibile. In questi studi la linea parentale U251, U251 cellule trasfettate con luciferasi (U251-Luc), o U87 immortalato cellule di coltura di tessuti GBM umani sono stati sospesi a 4-6 ml di SF-DMEM e iniettato 2,5 millimetri laterale (a d.......

Discussion

Modelli di mouse ortotopico di cancro al cervello umano può essere un ottimo strumento per valutare l'efficacia delle terapie cliniche, ma la cura deve essere presa per ottimizzare il posizionamento delle cellule nel tessuto cerebrale. Studi hanno dimostrato che eccessivi volumi aliquote, tecnica di iniezione ottimale e tassi di iniezione affrettate possono portare a mancanza di tenuta e la comparsa di cellule tumorali in luoghi indesiderati (ventricoli, midollo spinale, regioni extradurali, ecc.) E alta va.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment
Strumento stereotassico per piccoli animali con console di visualizzazione digitale	Kopf	Modello 940
Supporto per testa per anestesia a gas per topo	Kopf	Modello 923-B
Barre auricolari	per mouse Kopf	Medel 922
Illuminatore a fibre ottiche	Fisher	12-562-36
UltraMicroPump III	WPI	UMP3
Micro4 Microprocessore	WPI	UMC4
Trapano rotativo manuale a velocità variabile	Dremel	Modello 300
Punta da trapano dentale, 1,0 mm	Spoelting	514554
Adattatore per punta da trapano dentale: pinza da 3/32 di pollice	Dremel	481
Cuscinetto			per mouse
		di vaporizzazione isoflurano	per topi
Tubi medici e connettori			per collegare il vaporizzatore isoflurano con telaio
Instruments
Precision 25 μ l microsiringa	Hamilton	7636-01	Modello 702, senza ago
Aghi per microsiringhe, 26s G	Hamilton	7804-04	RN, 25 mm con punta 2
Forbici a punta fine (dritte, affilate/affilate)
Forbici
Pinze
Emostatici seghettati (2)
Pinze
Supplies
Sutures 5-0 vicryl P-3 13 mm (Ethicon)	MWI	J463G
Lame chirurgiche #10, inossidabili (Feather)	Fisher	296#10
Isoflurane (Fluriso)	VetOne	NDC 13985-528-60	Articolo #502017. Anestetico per inalazione di liquidi. La legge federale limita l'uso di questo farmaco da parte o su prescrizione di un veterinario autorizzato.
Carprofene (Rimadyl iniettabile 50 mg/ml)	Pfizer	NDC 61106-8507-01	diluito in soluzione salina
Unguento oftalmico (lacrime artificiali)	Rugby	NDC 0536-6550-91
Antibiotico topico (AK-Poly-Bac)	Akorn	NDC 17478-238-35
Antisettico topico povidone-iodio, 10% (Betadine)	Betadine	NDC 67618-150-04
Perossido di idrogeno, 30%	Pescatore	H325-100	per la visualizzazione dei punti di riferimento del cranio
Soluzione salina sterile	VetOne	NDC 13985-807-25	per soluzioni di diluizione, pulizia dei tessuti
Cera ossea	WPI	Articolo #501771
Teli sterili	McKesson	25-517
Guanti chirurgici sterili	McKesson	(da adattare)
Tamponi di garza sterili, 2 x 2	Fisherbrand
Garze sterili, 4 x 4	Fisherbrand	22-415-469
Tamponi per la preparazione dell'alcol (medi)	PDI	B603
Applicatori sterili con punta in cotone Fisherbrand		23-400-114
Tubo sterile da 0,5 ml con tappo a vite con tappi per cellule	USA Scientific	1405-4700	per cellule
Pipette sterili confezionate singolarmente Fisher		BD 357575	per soluzioni per la pulizia degli aghi
Siringhe da insulina BD con aghi	Fisher	329461	per analgesico
70% Etanolo			per la pulizia
Sterile diH2O			per la pulizia
Tubi in microfugo per soluzioni			per soluzioni per la pulizia dell'ago
Pennarello con punta in feltro (dedicato)			per la marcatura del cranio