Viene sviluppato un protocollo per esaminare gli effetti di un farmaco epigenetico DZNep sullo sviluppo, la fecondità e la sopravvivenza delle zanzare. Qui descriviamo le procedure per l'esposizione acquosa di DZNep a zanzare immature e un'esposizione ematica di DZNep a zanzare adulte, oltre a misurare l'inibizione dell'idrolasi SAH.
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Articolo metodologico
Saggi tossicologici per gli effetti di prova di un epigenetica droga sullo sviluppo, Fecondità e Sopravvivenza di malaria zanzare
In questo articolo
Sommario
Abstract
Resistenza insetticida pone un grave problema per i programmi di controllo della malaria. Le zanzare si adattano a una vasta gamma di cambiamenti nell'ambiente rapidamente, rendendo il controllo della malaria un problema onnipresente nei paesi tropicali. L'emergere di popolazioni resistenti agli insetticidi garantisce l'esplorazione di nuovi percorsi di destinazione della droga e composti per il controllo del vettore zanzara. Farmaci epigenetici sono ben stabiliti nella ricerca sul cancro, tuttavia, non si sa molto circa i loro effetti sugli insetti. Questo studio fornisce un semplice protocollo per esaminare gli effetti tossicologici di 3 Deazaneplanocin A (DZNep), un farmaco epigenetico sperimentale per la terapia del cancro, sul vettore della malaria, Anopheles gambiae. Un aumento di concentrazione-dipendente della mortalità e riduzione delle dimensioni è stata osservata in zanzare immaturi esposti a DZNep, mentre il composto ha ridotto la fecondità delle zanzare adulte rispetto a controllare i trattamenti. Inoltre, c'è stata una diminuzione tossicodipendenti in S -adenosilomocisteina (SAH) attività di idrolasi in zanzare in seguito all'esposizione a DZNep rispetto per controllare i trattamenti. Questi protocolli forniscono il ricercatore con una semplice procedura, step-by-step per valutare più endpoint tossicologici per un farmaco sperimentale e, a sua volta, dimostrano un approccio multi-polo unico per esplorare gli effetti tossicologici di farmaci o composti di epigenetici idrosolubili interessi contro le zanzare vettore e altri insetti.
Introduzione
La malaria è responsabile per il maggior numero di decessi insetti correlati al mondo. Si stima che circa 219 milioni di casi si verificano ogni anno in tutto il mondo, causando circa 660.000 morti, soprattutto in Africa 1. Nonostante gli sforzi concertati, la malaria programmi devono affrontare diverse sfide. Mentre insetticide trattati zanzariere e coperte componenti chiave forma irrorazione residue del programma, la resistenza agli insetticidi in popolazioni locali ostacolano questi sforzi 2. Il rapido aumento delle popolazioni di zanzare resistenti agli insetticidi è in gran parte attribuibile alla capacità delle zanzare di malaria di adatta....
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Protocollo
NOTA: Le tre parti del protocollo descrivono l'esposizione acquosa del farmaco DZNep alle zanzare larvali, un'esposizione a base di sangue di DZNep per femmine adulte di studiare l'effetto della fecondità, e SAH idrolasi inibizione da DZNep misurati utilizzando una semplice tecnica colorimetrica. Una rappresentazione schematica di questi test è mostrato in figura 1.
1. immaturi Mosquito sviluppo e la sopravvivenza saggi
NOTA: Questa sezione spiega l'uso di un farmaco solubile in acqua che colpisce lo sviluppo larve di zanzara e la sopravvivenza.
- Hatch A. uov....
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Risultati
La figura 1 è una rappresentazione schematica dei saggi; descrive le varie fasi della procedura descritta in questo articolo. Poiché il protocollo si basa su diversi cicli di vita zanzare, non vi è alcuna particolare sequenza da seguire per gli esperimenti qui descritti. L'utente può scegliere di effettuare uno o più test contemporaneamente, a seconda della disponibilità di esempio.
Figura 2 mostra la piastra impostato per lo sviluppo e la sopravviven.......
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Discussione
Ci sono diversi passaggi vitali per l'efficace applicazione di questo protocollo. Per il saggio larvale, occorre prestare attenzione a etichettare e replicare ogni concentrazione correttamente. Randomizzazione campioni di prova e aggiungendo la quantità di farmaco designato a rispettivi pozzetti di test è una parte importante di questo set up sperimentale. Prima di aggiungere 2 ° instar larve di zanzara ad una micropiastra a 96 pozzetti, ogni larva può essere messo su un tovagliolo di carta per 2-3 second.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo Victor Marquez per aver fornito DZNep.HCl e Scotty Bolling per la produzione degli alimentatori di sangue. I ceppi Mopti e SUA2La di An. gambiae sono stati ottenuti dal Malaria Research and Reference Reagent Resource Center (MR4). Questo lavoro è stato sostenuto dal Fralin Life Science Institute e dalla sovvenzione del National Institutes of Health 1R21AI094289 a Igor V. Sharakhov.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| micropiastra a 96 pozzetti | Fisher Scientific | 12565561 | |
| Piastra per colture cellulari | CytoOne | CC7682-7506 | |
| Centrifuga | Sorvall Fresco | 76003758 | È possibile utilizzare una centrifuga diversa |
| Rotoli di nastro adesivo colorati | Fisher | S68134 | |
| Microscopio di dissezione | Olympus | SZ | |
| DTNB | Sigma Aldrich | D8130 | |
| DZNep.HCl | Sigma Aldrich | SMLO305 | |
| per piatti per uova | |||
| Carte da filtro | Fisher | 09-795E | |
| Alimentatori in vetro | Virginia Tech | ||
| Omogeneizzatore | |||
| Elemento riscaldante | Fisher | Scientific NC0520091 | |
| Incubatrice | Percival scientific | I36VLC8 | È possibile utilizzare un'incubatrice diversa |
| Provetta per microcentrifuga, 2 ml | Axygen | 22-283 | |
| Provetta per microcentrifuga, 1,5 ml | Axygen | MCT-150-C | |
| Micropipetta | Eppendorf | 4910 000.069 | |
| Na2HPO4 | Fisher Scientific | M-3154 | |
| NaH2PO4 | Fisher Scientific | M-8643 | |
| Misuratore di pH | Mettler Toledo 7easy | S20 | |
| Lettore di lastre | Spectramax | M2 | |
| SAH | Sigma Aldrich | A9384 | negozio a -20 ° C |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 |
Riferimenti
- CDC Report. , Available from: http://www.cdc.gov/malaria (2010).
- Gatton, M. L., et al. The importance of mosquito behavioural adaptations to malaria control in Africa. Evolution; International Journal of Organic Evolution. 67, 1218-1230 (2013).
- Sternberg, E. D., Thomas, M. B.
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Ristampe e permessi
