의 비 용해성 세포 외 유출을 시각화<em> 크립토 콕 쿠스 네오 포르</em> 디지털 광학 현미경을 사용하여 대 식세포에서
Summary
우리는 macrophage- C.를 시각화하는 방법에 대해 설명합니다 콕 쿠스 네오 포르 만 스 (CN) 디지털 광 현미경을 사용하여 비 – 용해성 세포 외 유출의 프로세스에 특정 중점을 실시간으로 상호 작용. 개별적 감염된 대 식세포를이 방법을 사용하는 것은 이러한 현상의 다양한 양태를 확인하기 위해 조사 될 수있다.
Abstract
크립토 콕 쿠스 네오 포르 만에 의한 대 식세포의 감염의 많은 측면을 광범위하게 연구하고 잘 정의되어 있습니다. 그러나, 명확하게 이해되지 않는 한 특정의 상호 작용은 세포 외 유출 용균 비이다. 이 과정에서 효모 세포는 대 식세포와 CN 가능한 모두 나뭇잎 제대로 이해 메커니즘에 의해 세포 외 공간으로 해제됩니다. 여기서 우리는 시간 경과 현미경에 의해 24 시간 감염 기간에 대해 개별적으로 감염된 대 식세포의 큰 숫자를 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 감염된 대 식세포가 세포 배양 인큐베이터과 동일한 조건을 제공 현미경에 부착 된 CO 2 분위기의 가열 챔버 내에 수용된다. 라이브 디지털 현미경 정적 이미지에서 사용할 수없는 호스트와 병원체 간의 동적 상호 작용에 대한 정보를 제공 할 수있다. 그 반대의 경우도 마찬가지 대식 세포가 곰팡이 감염을 처리하는 방법에 대한 단서를 제공 할 수 각 감염된 세포를 시각화 할 수 있다는. 이 기술의 전복잡한 현상 뒤에있는 역학을 공부 SA 강력한 도구입니다.
Introduction
크립토 세포와 대식 세포 사이의 곰팡이 감염의 단계가 아니라 1-3 설명되어 있습니다. 효모 세포는 대 식세포에 의해 섭취 된 후, 상호 작용의 다양한 발생할 수 대식구는 세포 외 공간으로의 진균 부하 해제 용해되거나, 그것의 세포막 (4)의 범위 내에서 효모 세포를 유지하여 감염을 제어 할 수있다. 비 용균 세포 외 유출, 식세포가 주변 환경으로 크립토 셀의 일부 또는 전부를 소거하는 프로세스 또는 인접 셀 및 호스트와 병원체 모두 5 가능한 남아 : 그러나, 몇 년 전에 새로운 결과 두 그룹에 의해 독립적으로 설명 된 -8. 몇몇 연구는 이러한 상호 작용의 뒤에 분자 메커니즘을 이해하려고했지만 우리는 여전히이 현상을 원동력에 대한 전체 이해를 필요가 없습니다.
기능은 실시간으로 영상을 캡쳐하고 그 후 여러 감염을 분석 할에드 대 식세포는 하나가 곰팡이 감염시 형태와 대 식세포 심지어 스트레스에서 타이밍, 공간 능력, 변화에 관해서 비 용해성 세포 외 유출을 둘러싼 물리적 특성에 대해 많은 질문에 대답 할 수 있습니다. 세포 배양기의 것과 필적 환경에 수납 될 수 있도록함으로써, 우리는 식세포 진균 세포 상호 작용의 동적 특성을 엿볼 수있다. 연구진은이 과정의 다양한 구성 요소를 연구하기 위해이 기술을 사용하고 있습니다. 또 다른 그룹은 비 용해성 세포 외 유출이 단백질 도메인을 핵 WASH 10 삭제 있었 세포에서 차단 된 것을 보여주기 위해이 방법을 사용하는 동안이 과정에서 phagosome의 역할은, 형광 염색과 액틴 차단제 구를 사용하여 분명했습니다. 사이토 카인 시그널링의 효과도 실시간 현미경 (11)을 사용하여 확인되었다. 이 프로세스는 C. 한정되지 않는다 그와 같은 콕 쿠스 네오 포르 만은 칸디다 알비 칸스 (Candida albicans)로 관찰되었다, anothe대 식세포 (12)을 감염시키는 능력을 가진 곰팡이 병원균 r에. 이러한 연구 결과는이 방법이 우리에 대해 너무 조금 알고있는 지역에 풍부한 정보를 제공 할 수있는 방법에 대한 예입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기서 우리는 곰팡이 식세포 작용을 기록하고 24 시간 동안 실시간으로 분석 할 수있는 방법을 설명 하였다. 본 연구실은 비 용균 세포 외 유출의 시간적 측면 많은 공부이 프로토콜을 사용하고이 프로세스를 둘러싸고 형태 요소를 확인하기 위해 실시간으로 현미경을 사용하는 것을 계속할 것이다.
이 기술은 이상적인 결과를 산출하기 위해서는 특별한주의가 프로토콜의 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 NIH 상 5T32AI07506, 5R01AI033774, 5R37AI033142, 5R01AI052733에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
| Sabouraud Dextrose Agar | BD | DF0109-17-1 | |
| Sabouraud Dextrose Broth | BD | DF0382-17-9 | |
| Dubelcco's Modified Eagle's Medium(DMEM) | Corning Cellgro | 10-013-CV | |
| Fetal Calf Serum ( FCS) | Atlanta Biologicals | S12450 | |
| NCTC 109 | Invitrogen | 21340-039 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES Buffer | Corning Cellgro | 25-060-Cl | |
| Glutamax | Invitrogen | 35050-061 | |
| Non-essential Amino Acids | Corning Cellgro | 25-025-Cl | |
| 2-Mercaptoethanol | Invitrogen | 21985-023 | Toxic |
| 3003 Tissue Culture Petri Dishes | Fisher Scientific | 08772E | |
| CellStripper | Corning Cellgro | 25-056-Cl | |
| Mat-tek Glass Bottom Culture Dishes | MatTek | P35GC-1.5-14-C | |
| LPS | Sigma | L3137 | |
| Mouse IFN-g | Roche | NC 9222016 | |
| mAb 18B7 | Non-commerical antibody produced in our lab | ||
| Axiovert 200M Microscope with Incubating Chamber | Zeiss | ||
Riferimenti
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