マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除
Summary
原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。
Abstract
Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.
Introduction
脂肪は、20世紀の最後の数十年の間、肥満の劇的な増加に起因するメディアのスポットライトで注目すべきな外観を作った。肥満は現在、成人の三分の一以上と米国の小児および青年の17％（米国）1に影響を与えます。すべての民族グループにまたがる、肥満のまん延を取り巻く統計調査は、メキシコ系アメリカ人（40.4％）、すべてのヒスパニック（39.1％）、及び非と比較して非ヒスパニック系黒人は肥満（49.5％）の最高年齢調整率を持っていることが示されているヒスパニック系白人（34.3％）2。肥満の経済効果も医療制度への高まる懸念である。 2012年では、2005年の米国における肥満のためのケアの年間医療費は1902億ドル、全体の医療費の予算の約21％と推定された。悲しいことに、小児肥満は単独で、直接医療費140億ドルの原因であると推定された。統計的に、それは、平均医療費が決定された肥満を持つ個人は、この罹患率3-5ないものより年間2741ドル高かった。
2型糖尿病、脂質異常症、心血管疾患、癌、筋骨格障害および慢性炎症：肥満のような、様々な条件のための主要な危険因子である。肥満は深くメタボリックシンドロームと他の慢性疾患6-8の病因に関連付けられています。肥満や他の併存疾患との間のこのような抜本的なと負の接続では、科学的研究は、より良い現在の流行と脂肪で演奏多様で重要な役割を理解するために注意を集中している。
歴史的に、脂肪組織は取るに足らないと考えられていたとシンプルな充填組織としてのみ観察した。代謝、ホルモン調節、炎症、保護絶縁9：現在、脂肪は、身体の機能の多くの重要な役割を果たしていることが示されている。脂肪組織は、主に構成されている脂肪細胞だけでなく、周皮細胞、内皮細胞、単球、マクロファージおよび多能性幹細胞8が含まれています。脂肪組織は、個別のデポで体全体に分布している。主なデポは皮下、筋肉内、皮下発見し、直感的に10することができます。脂肪デポは、肥満症および関連障害8にデポ特定の感受性を示したデポ特定の代謝プロファイルを有することが示されている。
伝統的に、脂肪組織は、2つの主要なタイプに分類された：白色脂肪組織（WAT）および褐色脂肪組織（BAT）。最近の文献が示すものの、第3グループのプレゼンスは、ブライトまたはベージュ脂肪11洗礼 。脂肪組織は、異なる色、形態、代謝機能、生化学的特徴および表現10の遺伝的パターンを有することが示されている。 WATでの脂肪細胞は、単一の大きな脂肪滴とミトコンドリアの可変量を持っている。 WAT支配的身体の皮下および内臓の地域に含まれています。主に、エネルギー貯蔵および器官保護の部位としてWAT機能する。 BATでの脂肪細胞は多房形態と豊富なミトコンドリアを持っている。 BATは、胸部の首および大血管、ならびに肩甲骨12に主に位置している。熱発生7を制御するエネルギー消費する行動のBATは主に機能している。ブライトまたはベージュ脂肪は、BATと類似の形態および表現を共有することが示されているが、白色脂肪細胞11から発信されることが見出されている。
この原稿で説明した外科的方法は、以下のような要因に、異なる効果を分析する能力と研究者を提供します。環境、医薬品、遺伝学は、脂肪に持っている。だけでなく、有益なまたは有害な役割の脂肪は、病気と全体的な健康状態で再生されます。また、への脂肪組織の異なる種類を同定および単離するための方法を提供より良いデポ間の生化学的関係との違いの理解を可能にします。これは、場所、機能、および身体内の脂肪のタイプ間の関係を決定するのを助けることができる。この記載の方法は、総視覚化、遺伝子発現解析、タンパク質発現解析、組織学的検査、およびin vitro試験のための主要な細胞株を単離するための手段を提供することによって、これを達成する。現在、別の脂肪デポ、並びにそれらの解剖学的位置の代謝挙動への洞察を提供する多くの記事があります。しかし具体的には、ローカライズ特定し、これらのデポを分離する方法についての詳細な方法を提供しない。この外科的方法は、1つまたは2つのデポ13~14の単離物のために設計され、他の方法と比較して切開および汚染の最小量を有する複数のデポの単離を可能にする正確な技術を提供する。
このプロトコルの目的は、提供することである複数の解剖学的位置から貯蔵脂肪の異なるタイプの同定および単離のための正確な方法。
Protocol
Representative Results
Discussion
肥満は罹患率の大ホストと脂肪が完全に理解されていないが果たす役割の完全な理解につながることができます。脂肪の分野において、したがって継続的な研究が必要である。動物モデルは、特にマウスモデルは、病気や潜在的な製薬治療のテストの進行に初期の研究に最適です。これらのモデルを使用して、脂肪デポの正確な分離および切除は、脂肪の影響を受ける疾患の病理の研究にお?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors have no acknowledgements.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| DMEF-12 | Sigma Aldrich | D-6421 | Warm in waterbath before putting on tissue |
| 2 mL microcentrifuge tubes | Midsci | MCT-200-C-S | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK |
Riferimenti
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